[发明专利]双链核酸分子及利用其去除DNA文库中GLASS接头的方法在审
| 申请号： | 202080094771.5 | 申请日： | 2020-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN115461457A | 公开（公告）日： | 2022-12-09 |
| 发明（设计）人： | 闵罗英;裴真植;李旻燮;申相澈 | 申请（专利权）人： | 伊万基因诊断中心有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 永新专利商标代理有限公司 72002 | 代理人： | 左路;区斌 |
| 地址： | 韩国*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核酸 分子 利用 去除 dna 文库 glass 接头 方法 | ||
1.一种双链核酸分子，包含：
含有IIs型限制酶识别位点和长度为3至30个核苷酸(nt)的随机核苷酸序列的有义链；和
含有所述有义链的互补序列和3’端A尾的反义链。
2.权利要求1的双链核酸分子，其中在所述有义链的3’-端或所述反义链的5’-端进一步含有长度为1-10nt的随机核苷酸序列。
3.权利要求2的双链核酸分子，其中在所述有义链的3’端进一步含有的所述随机核苷酸序列仅由胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)或它们的组合组成。
4.权利要求2的双链核酸分子，其中在所述反义链的5’端进一步含有的所述随机核苷酸的碱基序列仅由胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)或它们的组合组成。
5.权利要求1的双链核酸分子，其中所述有义链的3’端和所述反义链的5’端通过环相互连接以具有发夹结构。
6.权利要求1的双链核酸分子，其中所述IIs型限制酶选自MmeI、FokI、Alw26I、BbvI、BsrI、EarI、HphI、MboI、SfaNI、AlwI、BsaI、BbsI、BbuI、BsmAI、BsmI、BspMI、Esp3I、HgaI、MboII、PleI、SfaNi、MnlI、CspCI、AloI、PpiI、PsrI、BplI、FalI、Bsp24I、BsaXI、HaeIV、CjeI、CjePI、Hin4I、BaeI、AlfI、BcgI、BslFI和Tth111I。
7.权利要求1的双链核酸分子，其中所述有义链包含IIs型限制酶识别位点和长度为6-10nt的随机核苷酸，并且所述随机核苷酸的碱基序列构成为使所述双链核酸分子的熔解温度(Tm)值为20℃或更高。
8.权利要求1的双链核酸分子，其中所述有义链由SEQ ID NO:1定义的碱基序列组成，并且所述反义链由SEQ ID NO:2定义的碱基序列组成。
9.权利要求5的双链核酸分子，其中所述双链核酸分子由SEQ ID NO:3定义的碱基序列组成。
10.一种组合物，其包含根据权利要求1至9中任一项的双链核酸分子、DNA连接酶和IIs型限制酶。
11.权利要求10的组合物，其中所述DNA连接酶是T4连接酶。
12.权利要求10的组合物，其中所述组合物用于在下一代测序(NGS)中改善索引DNA文库中的样品检测能力。
13.权利要求10的组合物，其中所述组合物用于在构建下一代测序的索引DNA文库的过程中去除未连接于插入物的游离接头。
14.一种用于去除下一代测序的索引DNA文库中的游离接头的试剂盒，其包含根据权利要求1至9中任一项的双链核酸分子、DNA连接酶和IIs型限制酶。
15.一种去除用于下一代测序的DNA文库中的游离接头的方法，包括以下步骤：
(a)在通过将用于下一代测序的接头连接于待分析的基因组DNA的双链DNA片段的两端而构建的用于下一代测序的DNA文库中处理根据权利要求1至8中任一项的双链核酸分子和DNA连接酶并使其反应；和
(b)用IIs型限制酶处理所得反应产物。
16.权利要求15的方法，其中所述接头包含索引序列、随机条码序列或两者。
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