[发明专利]用于蛋白质表达的mRNA构建体及其用途

说明书

本发明涉及mRNA或mRNA构建体，其包括：(a)编码靶蛋白或肽的区域，(b)在5′末端的β‑珠蛋白UTR区域，和(c)在3′末端插入BGH、BGH‑IRES或IRES‑BGH的区域，其中本发明的mRNA或mRNA构建体增强嵌合抗原受体或嵌合抗原受体蛋白(CAR蛋白)的细胞内表达、增强其表达稳定性、增强细胞内持久性、增加嵌合抗原受体的体内稳定性、和增加癌细胞的细胞毒性，因此可以有利地用于靶向实体癌的抗癌药物组合物和抗癌免疫疗法。

技术领域

本发明涉及一种mRNA构建体，其能够稳定且高效地诱导靶蛋白的表达，同时保持靶蛋白的功能，并且本发明的mRNA构建体包括，在编码靶蛋白(或肽)的区域上游的5′-β-珠蛋白UTR，并且包括在其下游的BGH、BGH-IRES、或IRES-BGH区域。

本申请基于韩国知识产权局在2019年11月26日提交的第2019-0152938号韩国专利申请，并要求其优先权，该申请公开的内容通过引用整体合并于此。

背景技术

在几十年来，治疗癌症的方法一直在不断变化和进步。从1800年代到1900年代，通常实施诸如外科手术、化学疗法和放射疗法的方法，但是由于它们的局限性开始显现，近年来，作为免疫细胞疗法，已经在开发细胞疗法技术，其从身体提取免疫细胞，并且在将它们放回之前通过基因工程增强或修饰细胞。这种技术的公知实例包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、嵌合抗原受体(CAR)、T细胞受体(TCR)技术等，特别是，正在进行使用CAR(嵌合抗原受体)的研究和临床试验，CAR是使用基因重组工程的人工受体。然而，由于基因偶然被引入基因组的随机位置，使用上述基因工程的基因治疗或细胞治疗技术面临着从不良免疫反应到安全问题的多重挑战。在这点上，在使用DNA的转染的CAR-NK细胞(嵌合抗原受体自然杀伤细胞)中存在CAR基因整合到基因组中或发生突变的问题，因此，不能确保安全性。为了解决这些问题，已经尝试使用瞬时转染的CAR-NK细胞。然而，在使用mRNA的瞬时转染中，mRNA的不稳定性和低转染水平以及靶蛋白表达水平成为障碍，因此，还没有产生积极结果的研究。

发明内容

技术问题

为了解决上述问题，本发明的一个方面提供了mRNA构建体，其可以用于转染以使得靶蛋白(或肽)在细胞内无基因组突变地表达。

技术方案

根据本发明的一个方面，提供了mRNA构建体，其包括(a)编码靶蛋白或肽的区域，(b)靶蛋白编码区上游的5′-β-珠蛋白UTR区域，和(c)靶蛋白编码区下游的BGH、BGH-IRES或IRES-BGH区域。

根据本发明的一个实施方案，mRNA构建体可以用于瞬时转染。

根据本发明的另一个实施方案，靶蛋白(a)可以是嵌合抗原受体(CAR)。

根据本发明的另一个实施方案，CAR可以包括能够特异性结合靶的胞外域、穿透细胞膜的跨膜(TM)结构域、和诱导细胞内信号转导的胞内域。

根据本发明的另一个实施方案，所述胞外域可以是其中轻链和重链通过接头连接的抗体片段(ScFv)，并且所述胞内域可以是CD28并且可以进一步包括DAP10和/或CD3z。

根据本发明的另一个实施方案，CAR的胞外域和TM结构域可以通过间隔区(spacer)连接，并且间隔区可以是Myc-铰链。

根据本发明的另一个实施方案，mRNA构建体可以在5′末端包括帽，并且可以在3′末端包括多聚(A)尾。

另外，本发明提供了包括mRNA构建体的碱基序列或其互补碱基序列的重组载体。

另外，本发明提供了一种瞬时转化体的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备mRNA构建体或重组载体；以及

(2)将所述mRNA构建体或所述重组载体引入细胞中。