[发明专利]用于蛋白质表达的mRNA构建体及其用途

权利要求书

1.一种mRNA构建体，包括：(a)编码靶蛋白或肽的区域；(b)靶蛋白编码区上游的5′-β-珠蛋白UTR区；和(c)靶蛋白编码区下游的BGH、BGH-IRES、或IRES-BGH区。

2.如权利要求1所述的mRNA构建体，其中所述靶蛋白或肽(a)是嵌合抗原受体(CAR)。

3.如权利要求2所述的mRNA构建体，其中所述CAR包括能够特异性结合靶的胞外域、穿透细胞膜的跨膜结构域和诱导细胞内信号转导的胞内域。

4.如权利要求3所述的mRNA构建体，其中所述胞外域是抗体片段(ScFv)，其中轻链和重链通过接头连接，并且所述胞内域是CD28。

5.如权利要求4所述的mRNA构建体，其中所述胞内域进一步包括DAP10和/或CD3z。

6.一种重组载体，其包括与权利要求1至5中任一项的mRNA构建体的碱基序列对应或互补的DNA碱基序列。

7.一种转化体的制备方法，包括以下步骤：(1)制备权利要求1至5任一项所述的mRNA构建体；(2)将mRNA构建体引入宿主细胞。

8.根据权利要求7的转化体制备方法，其中步骤(2)是在110V-140V的条件下通过NEPA21电穿孔进行的。

9.一种CAR-NK细胞的制备方法，包括以下步骤：(a)制备权利要求2的mRNA构建体；和(b)将所述mRNA构建体引入NK细胞中。

10.如权利要求9所述的CAR-NK细胞制备方法，其中所述步骤(b)的所述NK细胞是原代NK细胞，并且将所述mRNA构建体向所述NK细胞中的所述引入通过NEPA21电穿孔在190V至200V的条件下进行。

11.一种通过权利要求9或权利要求10的方法制备的CAR-NK细胞，其中所述细胞的特征在于，表达CAR蛋白3天。

12.一种用于治疗癌症的药物组合物，其包括权利要求11所述的CAR-NK细胞作为活性成分。

13.如权利要求12所述的药物组合物，其中所述癌症是实体癌。