[发明专利]生物分子的标记

权利要求书

1.可逆地标记生物分子的方法，所述方法包括：

a.提供接头分子，所述接头分子包含含有反应中心的第一官能团、含有反应中心的第二官能团，以及可切割部分，例如可水解部分；

b.在所述生物分子和所述第一官能团的反应中心之间形成共价键；

c.在第一标记物和所述第二官能团的反应中心之间形成共价键；

d.切割所述接头分子的所述可切割部分，例如水解所述接头分子的所述可水解部分，以去除所述第一标记物并且以形成包含反应中心的第三官能团；

e.在其他分子和所述第三官能团的反应中心之间形成共价键以重新形成所述可切割部分，例如所述可水解部分。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述其他分子包含第四官能团，例如其中所述第四官能团与所述第二官能团相同。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述方法还包括步骤f.在第二标记物和所述第四官能团的反应中心之间形成共价键。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述方法还包括切割所述可切割部分，例如，水解所述可水解部分(例如席夫碱部分)，以去除所述第二标记物并且以重新形成所述第三官能团。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述方法还包括步骤h.在其他分子和所述第三官能团之间形成共价键以重新形成所述可切割部分，例如所述可水解部分(例如所述席夫碱部分)，步骤e的所述其他分子可与步骤h的种类相同。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述其他分子包含第二标记物。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述接头分子包含以下通式：

其中FG表示所述包含反应中心的第二官能团；

Z表示选自脂族键或芳族键之一的非反应性基团；

A-B-C一起表示所述可切割部分，例如，所述可水解部分(例如所述席夫碱部分)；

Y表示选自脂族键或芳族键的非反应性基团；

LG表示包含反应中心的第一官能团。

8.根据权利要求7所述的方法，其中Z表示聚醚链，例如包含最多5个乙二醇单体的聚乙二醇链。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述可切割部分A-B-C表示以下部分之一：

其中R^x表示氢原子、氘原子、脂族键或芳族键之一。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述生物分子是多核苷酸，例如DNA链或RNA链。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述接头分子是S-腺苷-l-甲硫氨酸辅因子的类似物。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤b.在所述生物分子和所述第一官能团的反应中心之间形成共价键还包括提供催化剂，例如酶，例如能够从S-腺苷-l-甲硫氨酸辅因子类似物中转移烷基的DNA甲基转移酶。

13.根据权利要求11或12中任一项所述的方法，其中所述接头分子具有以下通式：

其中FG表示所述第二官能团；

Z表示选自脂族键或芳族键之一的非反应性基团；

A-B-C表示所述可切割部分，例如所述可水解部分(例如，席夫碱部分)；

Y表示选自脂族键或芳族键之一的非反应性基团；

U表示选自以下之一的不饱和键：烯烃、炔烃、芳基、包含羰基的碳原子、包含一个或两个S＝O键的硫原子；

K表示1或2的整数；以及

W^-是反离子。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述接头分子包含不饱和部分U，例如位于中心的β位的烯烃或炔烃。