[发明专利]用于测序的DNA和RNA的单管制备

权利要求书

1.一种制备用于测序的RNA和DNA靶标混合物的方法，所述方法包括：

a)提供包含RNA和DNA靶标的样品；

b)在不允许DNA变性的条件下使所述样品与靶标特异性引物接触；

c)用具有反转录酶活性的核酸聚合酶延伸与至少一个RNA靶标杂交的所述靶标特异性引物以形成cDNA链；

d)使所述样品与RNaseH活性及核酸末端修复活性接触以形成双链DNA和双链cDNA混合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标特异性引物包含条形码。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述条形码将所述双链DNA和双链cDNA混合物中的cDNA分子与DNA分子区分开。

4.根据权利要求1至3所述的方法，其中所述核酸末端修复活性由DNA聚合酶、核酸外切酶和多核苷酸激酶的混合物组成。

5.根据权利要求1至4所述的方法，所述方法进一步包括对所述RNA和DNA靶标进行片段化的预备步骤。

6.根据权利要求1至5所述的方法，所述方法进一步包括使所述双链DNA和双链cDNA混合物与衔接子接触以形成衔接的DNA。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述衔接子包含一个或多个条形码。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述条形码选自唯一分子标识符(UID)和样品标识符(SID)。

9.根据权利要求6所述的方法，所述方法进一步包括对所述衔接的DNA进行扩增及任选地进行测序的步骤。

10.一种核酸文库，所述核酸文库由包含以下各项的方法形成：提供包含RNA和DNA靶标的样品；

a)在不允许DNA变性的条件下使所述样品与靶标特异性引物接触；

c)用具有反转录酶活性的核酸聚合酶延伸与至少一个RNA靶标杂交的所述靶标特异性引物以形成cDNA链；以及

d)使所述样品与RNaseH活性及核酸末端修复活性接触以形成双链DNA和双链cDNA混合物。

11.根据权利要求10所述的文库，其中双链DNA和双链cDNA混合物中的DNA进一步包含衔接子。

12.根据权利要求10至11所述的文库，其中所述靶标特异性引物包含条形码，并且所述双链cDNA可通过所述条形码的存在与所述双链DNA区分。

13.一种用于通过根据权利要求1所述的方法制备用于测序的RNA和DNA靶标混合物的试剂盒，所述试剂盒包括：

a)一个或多个靶标特异性引物，其具有条形码；

b)核酸聚合酶，其具有反转录酶活性；

c)RNaseH；

d)DNA聚合酶，其具有3′-5-核酸外切酶活性；

e)多核苷酸激酶。

14.根据权利要求13所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包括衔接子和DNA连接酶。

15.根据权利要求14所述的试剂盒，其中所述衔接子包括一个或多个分子条形码和通用引物结合位点。