[发明专利]具有选择性可切割接头的双特异性结合构建体

说明书

描述了具有蛋白酶可切割接头的双特异性结合构建体的新形式及其制备方法。此外，还描述了在治疗性适应症中的用途。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年6月7日提交的美国临时申请号62/858,509和2019年6月7日提交的美国临时申请号62/858,630的优先权。出于所有目的，上述申请各自通过引用并入本文。

序列表的引用

本申请含有已经以ASCII格式电子递交的序列表并且该序列表特此通过引用以其全文并入。创建于2020年6月4日的所述ASCII副本名为A-2406-WO-PCT_SL.txt且大小为164,621字节。

技术领域

本发明属于蛋白质工程领域。

背景技术

近年来，双特异性结合构建体已显示出治疗前景。例如，以双特异性T细胞衔接子形式靶向CD3和CD19两者的双特异性结合构建体在低剂量下显示出令人印象深刻的功效。Bargou等人(2008),Science[科学]321:974-978。此形式包含通过柔性接头连接的两种scFv，其中一种靶向CD3，另一种靶向肿瘤抗原CD19。此独特的设计允许双特异性结合构建体使活化的T细胞接近靶细胞，导致靶细胞的细胞溶解性杀伤。参见例如，WO 99/54440A1(美国专利号7,112,324 B1)和WO 2005/040220(美国专利申请公开号2013/0224205A1)。后来的发展是与CD3∈链的N-末端处的背景独立表位(context independentepitope)结合的双特异性结合构建体(参见WO 2008/119567；美国专利申请公开号2016/0152707A1)。

在生物制药工业中，分子会在接受治疗的患者中表现出不希望的、有害的副作用，特别是药物在施用于患者后具有活性的情况下。例如，在小分子药物中，这些副作用可以通过施用一旦代谢就变得有活性的无活性前药来最小化。介导细胞的细胞毒性的双特异性结合构建体会表现出这些不希望的副作用中的一些。因此，在本领域中需要具有有利的药代动力学特性及治疗功效以及提供有效的生产、增加的稳定性和最小化的副作用的形式的双特异性治疗剂。

发明内容

本文描述了双特异性结合构建体的几种新的形式。在一个实施例中，本发明提供了双特异性结合构建体，该双特异性结合构建体包含含有具有式VH1-L1-VH2-L2-VL1-L3-VL2的氨基酸序列的多肽链，其中VH1和VH2包含免疫球蛋白重链可变区，VL1和VL2包含免疫球蛋白轻链可变区，并且L1、L2和L3是接头，其中L1为至少10个氨基酸、L2为至少15个氨基酸、并且L3为至少10个氨基酸，其中L1或L3包含蛋白酶切割位点，并且其中该双特异性结合构建体可以与免疫效应细胞和靶细胞结合。

在另一个实施例中，本发明提供了双特异性结合构建体，该双特异性结合构建体包含含有具有式VH1-L1-Fc-L2-VH2-L3-VL1-L4-Fc-L5-VL2的氨基酸序列的多肽链，其中VH1和VH2包含免疫球蛋白重链可变区，VL1和VL2包含免疫球蛋白轻链可变区，Fc包含免疫球蛋白重链恒定结构域-2和免疫球蛋白重链恒定结构域-3，并且L1、L2、L3、L4、和L5是接头，其中L1为至少10个氨基酸、L2为至少10个氨基酸、L3为至少15个氨基酸、L4为至少10个氨基酸、并且L5为至少10个氨基酸，并且其中L1、L2、L4和L5进一步包含至少5个氨基酸的蛋白酶切割位点，并且其中该双特异性结合构建体可以与免疫效应细胞和靶细胞结合。

在另外的实施例中，本发明提供了编码本文所述的双特异性结合构建体的核酸，和包含这些核酸的载体。此外，本发明提供了包含本文所述的载体的宿主细胞。

在又其他实施例中，本发明提供了制造本文所述的双特异性结合构建体的方法，该方法包括(1)在表达双特异性结合构建体的条件下培养宿主细胞，以及(2)从细胞团或细胞培养上清液中回收双特异性结合构建体，其中该宿主细胞包含编码本文所述的双特异性结合构建体中的任一种的一种或多种核酸。