[发明专利]具有选择性可切割接头的双特异性结合构建体

权利要求书

1.一种双特异性结合构建体，该双特异性结合构建体包含含有具有式VH1-L1-VH2-L2-VL1-L3-VL2的氨基酸序列的多肽链，其中VH1和VH2包含免疫球蛋白重链可变区，VL1和VL2包含免疫球蛋白轻链可变区，并且L1、L2和L3是接头，其中L1为至少10个氨基酸、L2为至少15个氨基酸、并且L3为至少10个氨基酸，其中L1或L3包含蛋白酶切割位点，并且其中该双特异性结合构建体可与免疫效应细胞和靶细胞结合。

2.一种双特异性结合构建体，该双特异性结合构建体包含含有具有式VH1-L1-scFc_{子结构域1}-L2-VH2-L3-VL1-L4-scFc_{子结构域2}-L5-VL2的氨基酸序列的多肽链，其中VH1和VH2包含免疫球蛋白重链可变区，VL1和VL2包含免疫球蛋白轻链可变区，scFc包含免疫球蛋白重链恒定结构域-2和免疫球蛋白重链恒定结构域-3的子结构域1或子结构域2，并且L1、L2、L3、L4、和L5是接头，其中L1为至少10个氨基酸、L2为至少10个氨基酸、L3为至少15个氨基酸、L4为至少10个氨基酸、并且L5为至少10个氨基酸，并且其中L1、L2、L4和L5进一步包含至少5个氨基酸的蛋白酶切割位点，并且其中该双特异性结合构建体可与免疫效应细胞和靶细胞结合。

3.如权利要求1所述的双特异性结合构建体，其中该蛋白酶切割位点存在于L1和L3两者中。

4.如权利要求1所述的双特异性结合构建体，其进一步包含至少一个半胱氨酸钳。

5.如权利要求4所述的双特异性结合构建体，其中该半胱氨酸钳位于促进该VH1和VL1亚基、该VH2和VL2亚基、或这些scFc亚基之间的连接的位置。

6.如权利要求2所述的双特异性结合构建体，其进一步包含至少一个半胱氨酸钳。

7.如权利要求6所述的双特异性结合构建体，其中该半胱氨酸钳位于促进该VH1和VL1亚基、该VH2和VL2亚基、或这些scFc亚基之间的连接的位置。

8.如权利要求1所述的双特异性结合构建体，其进一步包含半衰期延长部分。

9.如权利要求8所述的双特异性结合构建体，其中该半衰期延长部分包含另外的接头和编码人IgG1、IgG2、或IgG4抗体的单链免疫球蛋白Fc区(scFc)。

10.如权利要求9所述的双特异性结合构建体，其中该另外的接头包含蛋白酶切割位点。

11.如权利要求10所述的双特异性结合构建体，其中该scFc多肽链包含抑制Fcγ受体(FcγR)结合的一种或多种改变和/或延长半衰期的一种或多种改变。

12.如权利要求1或2所述的双特异性结合构建体，其中该VH1、VH2、VL1、和VL2都具有不同的序列。

13.如权利要求1或2所述的双特异性结合构建体，其中

a.该VH1序列包含SEQ ID NO:65或67且该VL1序列包含SEQ ID NO:66或68，并且该VH2序列包含SEQ ID NO:75或77且该VL2序列包含SEQ ID NO:76或78，或者

b.该VH1序列包含SEQ ID NO:75或77且该VL1序列包含SEQ ID NO:76或78，并且该VH2序列包含SEQ ID NO:65或67且该VL2序列包含SEQ ID NO:66或68。

14.如权利要求1或2所述的双特异性结合构建体，其进一步包含用另外的接头(L0)连接到该VH1的另外的部分，其中L0的长度为至少5个氨基酸。