[发明专利]一种重组谷氨酸棒杆菌及谷胱甘肽的制备方法

权利要求书

1.一种谷胱甘肽的制备方法，其特征在于：采用谷氨酸棒杆菌基因工程菌生产所述的谷胱甘肽，

所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌中过表达双功能谷胱甘肽合成酶的基因，所述的双功能谷胱甘肽合成酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，

将所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌进行扩大培养后，接种至发酵培养基中进行发酵培养，在发酵培养的同时分批添加补料液，并控制发酵培养的温度为28~32℃，pH为6.5~7.2，发酵培养时间为45~50h；然后加入诱导剂继续培养9~12h，再加入谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸，并提高温度至36~38℃培养至所述的谷胱甘肽的产量不再增加，

所述的谷氨酸、所述的甘氨酸、所述的半胱氨酸在反应体系中的初始浓度范围分别为80~120mM，

所述的发酵培养的发酵培养基包括如下组分：碳源5~30g/L、氮源1~4 g/L、无机盐及微量元素0.5~15 g/L、可选择性添加的生长因子0.001~1g/L，

所述的补料液为葡萄糖溶液、酵母抽提物、蔗糖、胰蛋白胨、玉米浆、甘油中的一种或多种，所述的补料液的浓度为400~500g/L。

2.根据权利要求1所述的谷胱甘肽的制备方法，其特征在于：所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌的制备方法包括如下步骤：

（1）将所述的双功能谷胱甘肽合成酶的基因克隆到pEC-XK99E质粒上，得到重组质粒；

（2）将所述的重组质粒转化谷氨酸棒杆菌，得到所述的谷氨酸棒杆菌基因工程菌。

3.根据权利要求2所述的谷胱甘肽的制备方法，其特征在于：所述的步骤（1）的具体方法为：以质粒pET28a-gshFst为模板进行DNA的扩增，然后将扩增产物采用BamHІ和SmaI进行双酶切，再与经BamHІ和SmaI酶切处理后的所述的pEC-XK99E质粒进行连接，得到所述的重组质粒。

4.根据权利要求1所述的谷胱甘肽的制备方法，其特征在于：所述的碳源为玉米浆、糖蜜、蔗糖、葡萄糖、甘油中的一种或多种；所述的氮源为蛋白胨、酵母抽提物、尿素中的一种或多种；所述的无机盐及微量元素为磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、氯化铵、氯化钾、氯化钠、碳酸钙、硫酸铵、硫酸镁中的一种或多种，所述的生长因子为生物素、维生素B1、维生素B6中的一种或多种。