[发明专利]用于保存生物样本中核酸的样本保存液及其使用方法

说明书

本发明提供了一种用于保存生物样本尤其是唾液样本中核酸的样本保存液及其使用方法。所述样本保存液包含：细胞裂解剂、缓冲剂、螯合剂、盐离子、抗微生物剂和核酸保护剂。所述样本保存液可以在环境稳定下保存唾液中DNA和RNA，确保唾液中人类基因组DNA在保存过程中的完整性，即获得高分子量的DNA，并且快速灭活唾液样本中的病原体微生物。

技术领域

本发明涉生物样本保存的领域。更具体地，本发明涉及一种用于保存核酸样本，特别是用于保存唾液中核酸的样本保存液和使用方法。

背景技术

1901年Michacles和1903年Kirk用检测唾液成分作为诊断疾病的辅助工具。人们对于用唾液作为疾病检测和健康监护的诊断工具的兴趣正与日俱增，原因在于其无创可得性、经济性、样本易于收集和处理，以及越来越多的科学依据(Yan等,ProteomicsClin.Appl.3:116,2009)。唾液已用于检测例如龋病风险、牙周炎、口腔癌、乳腺癌、肺癌、干燥综合征唾液腺疾病和传染性疾病(如肝炎、HIV和HCV)。因此，唾液是替代血液、血清或血浆的一种吸引人的诊断样品。

唾液中的白细胞和上皮脱离细胞的基因组成分和血液中的人类基因组是高度一致的，因此，唾液对于核酸分析而言是理想的，现如今唾液样本已经被认为是大健康基因筛查的重要取材。分析唾液以监测健康状况和疾病的能力是口腔健康促进与研究的一个非常希望达到的目标。为全面实现唾液作为生物标志物来源的诊断和研究应用，需要在用户友好的集成型医疗点收集系统中由非专业人员收集、处理及室温储存唾液的系统。

保存生物样本的保存液，经常使用市售UTM保存液，以PBS缓冲液为主体，加入氨基酸、抗生素和BSA等物质保存生物样本如唾液中的细胞，但是对于细胞样本中的核酸则不能长期保存。

中国专利申请CN111690642A公开了一种采样液和保存液用于唾液样本的保存，所述采样液包括以下组分：氯化钠、硫酸氢二钠、硫酸二氢钾、氯化钾、水、苯酚红；所述保存液包括以下组分：葡萄糖、海藻糖、枸杞多糖、芦荟多糖、柳硫汞钠盐、水。该发明的保存液中加入了海藻糖、枸杞多糖和芦荟多糖，可极大的减缓核酸在唾液样本中降解的速度，延长病毒在样本中存活的时间，保证检测的准确性。此方案采用两种溶液，操作繁琐，优点是可以采集唾液中的活病毒，但是在环境温度下不能保证唾液中核酸的长时间稳定。

中国专利申请CN111020001A公开了一种新型唾液保存液及其制备方法和应用，包括如下组分：EDTA 1-10mmol/L、Tris-HCl 1-50mmol/L、氯化钠10-100mmol/L、山梨酸钠0.1-3％(w/v)、双乙酸钠0.1-3％(w/v)、proclin 300 0.01-0.1％(v/v)、TWEEN20 0.1-1％(v/v)、NP40 0.1-1％(w/v)、SDS 0.1-2％(w/v)，此方案可以保存人类唾液中基因组DNA完整性3个月以上，但是并不保存病原体DNA和RNA。

中国专利申请CN111378719A公开了一种用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂样本保存液及其应用和方法。试剂样本保存液包括尿素、十二烷基硫酸钠、反式-1，CDTA、Tris-HCl、抗坏血酸钠、对羟基苯甲酸丙酯、重氮烷基咪唑脲、乙醇、蔗糖和蛋白酶K。将所述试剂样本保存液与人体唾液混合均匀后常温保存。此方案可以保存唾液基因组DNA，但依然不能保存唾液中的病原体DNA和RNA。

中国专利申请CN110072999A公开了核酸保护样本保存液及其制造和使用方法。样本保存液包括载体、离液剂、缓冲剂、螯合剂、表面活性剂、醇、酸和粘液溶解剂。作为水溶液的样本保存液可包括水作为载体。优选的实施方案包括水、硫氰酸胍、Tris、EDTA、SLS、SDA3C、HCl和N-乙酰基-L-半胱氨酸。使用方法包括提供包含核酸的生物样品并使生物样品与样本保存液接触。试剂盒包括置于生物样品收集装置的一部分中的样本保存液。此方案可以保存唾液基因组DNA用于全外测序等，但是该发明并未研究对于唾液中RNA的保存。