[发明专利]一种骨修复材料的制备方法

说明书

本发明提供一种骨修复材料的制备方法，采用异丙醇和纯化水交替清洗脱脂，过氧化氢和乙二胺溶液联合脱蛋白，并通过纯化水反复振荡清洗，注射用水反复翻转清洗，有效去除了抗原性物质，并且同时避免了通过高温煅烧，导致骨修复材料的抗压性能较差、诱导性降低的问题，通过本发明提供的制备方法获得的骨修复材料保留了良好的抗压性能和诱导性。

技术领域

本发明属于医用材料技术领域，具体涉及一种骨修复材料的制备方法。

背景技术

骨移植手术应用于骨科临床已有多年的历史，自体骨移植作为植骨的金标准，在临床上有着很好的愈合效果。自体骨多取自患者腓骨或髋骨，取骨量有限，患者承受二次手术的痛苦，自体骨移植应用因此而受限。

为了解决骨移植的问题，人们使用人工骨、同种异体骨、异种异体骨等材料,代替自体骨移植用于临床治疗。人工骨材料多为经1000℃以上高温煅烧后的羟基磷灰石晶体或经化学反应合成的β-磷酸三钙或硫酸钙晶体，但其无法模拟天然骨材料复杂的微观结构，天然骨中----尤其是以弱结晶形式存在的少量碳酸盐，其对于骨的降解性有着重要的影响。因而人工骨材料的降解性一直是制约其临床应用的瓶颈。

同种异体骨来源于人尸体骨，制备过程中只需除去脂肪和部分蛋白（主要是抗原性物质），经消毒灭菌即可。由于未完全除去蛋白，所以同种骨的抗压性强，材料与人体的组织相容性好，植入后免疫排斥轻，骨诱导性能也相对较好。但由于捐赠者的年龄差异，可用于骨移植的骨源十分有限，且同种骨有一定的病毒感染风险。

异种异体骨多为牛骨或猪骨，由于与人体骨结构相似，且来源广泛，应用前景良好。最具代表性的牛骨产品即Bio-Oss骨粉——选取牛股骨末端，通过甲苯索氏抽提脱脂，乙二胺溶液脱蛋白处理，160℃干燥后经350℃低温煅烧可得无机松质骨颗粒。由于使用了煅烧工艺，Bio-Oss骨粉中的羟基磷灰石部分结晶，导致骨材料抗压性较差，仅适用于口腔、颌面骨等部位的骨缺损，而对于缺损部位较大、需要一定力学强度支持的骨缺损修复，并无理想的临床应用。

新鲜骨中引起免疫反应的物质,主要是非胶原蛋白及骨细胞膜表面的糖蛋白、脂肪。如何有效地破坏细胞表面抗原，除去抗原性物质，获得低免疫原性的异种骨材料是异种骨制备工艺中的重点。在现有技术中，去抗原的方法主要有深低温冷冻，化学试剂（如甲醇/氯仿混合溶液）、表面活性剂（SDS，Triton等）、蛋白酶处理以及高温煅烧等。高温煅烧可完全除去抗原及有机质成分，但由于完全去除有机质，骨材料的抗压性能较差，仅具有骨传导性，失去了诱导性，无法应用于骨科的缺损修复中；而使用化学试剂或酶处理，对于抗原性较高的异种骨来说，无法有效的去除抗原，植入体内后会有免疫排斥的风险。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一种骨修复材料的制备方法，能够有效去除异体骨颗粒中的非胶原蛋白及骨细胞膜表面的糖蛋白、脂肪，并能有效保持骨材料的抗压性能及骨传导性。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一方面，提供一种骨修复材料的制备方法，包含以下步骤：

1）取脱脂后的动物骨颗粒，加入到过氧化氢中，静止12-24h,弃去过氧化氢，置于纯化水中振荡清洗3-6次，75-100℃干燥5-7h，过14目筛，获得过筛后的动物骨颗粒；

2）将所述过筛后的动物骨颗粒加入乙二胺溶液中加热至微沸，然后在100-125℃保持7-9h，弃去废液，加入纯化水中振荡清洗3次，重复该步骤两次；

3）将步骤2）获得的动物骨颗粒使用纯化水在密闭容器中清洗15次，使用注射用水清洗2次，清洗过程 3-6min/次，清洗期间翻转容器，弃掉废液，获得脱蛋白骨颗粒；

4）取透明质酸钠凝胶与所述脱蛋白骨颗粒，按照质量比10:5~7混合均匀，封口，静置4-6min，冻干，获得所述骨修复材料。