[发明专利]一种尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的检测方法

说明书

本发明涉及一种尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的检测方法，分别以细胞色素C、胰岛素、胸腺五肽和还原型谷胱甘肽作为对照品，采用高效液相色谱法和示差检测器进行检测，通过GPC软件计算回归方程，再将尿多酸肽注射液制成供试品溶液，按照相同的色谱条件进行测定，由GPC软件分析尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布，其色谱条件包括：色谱柱为Sepax Zenix SEC‑100；以乙腈、水和三氟乙酸的混合溶液作为混合流动，其中，乙腈、水和三氟乙酸的体积比为50～60:40～50:0.2。采用本发明的方法可以准确测定样品中分子量在5000D以下的小分子多肽，专属性好、分离度高。

技术领域

本发明属于化学药物分析方法技术领域，具体涉及一种尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的检测方法。

背景技术

尿多酸肽注射液(Uroacitides Injection)，本品规格为每瓶100ml，由合肥永生制药有限公司研制，于2016年批准上市，按照《药品注册管理办法》规定，属于未在国内外上市销售的一类新药。

尿多酸肽注射液从正常人尿中提取并经纯化制得，含有能够促进癌细胞走向良性分化的多组分混合物，主要为马尿酸、苯乙酸、吲哚乙酸、苯乙酰谷氨酰胺和小分子多肽，通过多组分的共同作用，发挥抗癌效果。目前主要用于非小细胞肺癌、原发性肝癌及乳腺癌的临床治疗。

尿多酸肽注射液中小分子多肽是诱导分化作用的主要物质，因此需要建立合适的分析方法对样品中分子量及分子量分布进行研究，达到对尿多酸肽注射液中小分子多肽准确、有效的检测和监控。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的检测方法，专属性好、分离度高，可以准确测定样品中分子量在5000D以下的小分子多肽。

本发明的技术方案如下：

一种尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的检测方法，分别以细胞色素C、胰岛素、胸腺五肽和还原型谷胱甘肽作为对照品配制四种对照品溶液，采用高效液相色谱法和示差检测器进行检测，以对照品保留时间为横坐标，分子量的log值为纵坐标，通过GPC软件计算回归方程，再将尿多酸肽注射液配置成供试品溶液，按照相同的色谱条件进行测定，由GPC软件分析尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布，其色谱条件包括：以亲水性球型高聚物为填充剂，色谱柱为Sepax Zenix SEC-100；以乙腈、水和三氟乙酸的混合溶液作为混合流动相进行等度洗脱，其中，乙腈、水和三氟乙酸的体积比为50～60:40～50:0.2。

采用本发明的检测方法，在色谱分析的过程中，采用细胞色素C、胰岛素、胸腺五肽和还原型谷胱甘肽作为对照品。在一种优选方案中，四种对照品的重均分子量如下：细胞色素C的重均分子量为12384；胰岛素的重均分子量为5777；胸腺五肽的重均分子量为679；还原型谷胱甘肽的重均分子量为307。

采用本发明的检测方法，可以检测尿多酸肽注射液中分子量在5000D以下的小分子多肽，专属性好、分离度高。

对于本发明的检测方法而言，对色谱柱和混合流动相的要求比较高。在经历了大量的探索实验之后，本发明人最终确定以亲水性球型高聚物为填充剂，Sepax Zenix SEC-100作为色谱柱，以体积比为50～60:40～50:0.2的乙腈、水和三氟乙酸的混合溶液作为混合流动相，可以准确测定样品中分子量在5000D以下的小分子多肽，专属性好、分离度高。在相同的色谱条件下，采用其他色谱柱，例如，以TSK凝胶色谱柱(TSK-GEL G2000 SW色谱柱)进行检测时，样品溶液分离效果差，对照品溶液不成线性。

在相同的色谱条件下，即使流动相中均包含相同的组分，也需要严格控制流动相中乙腈、水和三氟乙酸的配比，否则，在色谱分析时，也会出现对照品不出峰或线性差，分离效果不佳的问题。