[发明专利]一种高效的酵母双杂交三框文库构建技术

权利要求书

1.一种用于高效酵母双杂交三框文库构建的重组载体，其特征在于：所述重组载体有三种，所述三种重组载体是在原始PGADT7载体分别插入碱基序列1、碱基序列2和碱基序列3构建而成，所述碱基序列1的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，所述碱基序列2的核苷酸序列为SEQ ID NO：2，所述碱基序列3的核苷酸序列为SEQ ID NO：3。

2.一种权利要求1所述用于高效酵母双杂交三框文库构建的重组载体的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1)，全基因合成碱基序列1、碱基序列2和碱基序列3，所述碱基序列1的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，所述碱基序列2的核苷酸序列为SEQ ID NO：2，所述碱基序列3的核苷酸序列为SEQ ID NO：3；

步骤2)，SfiI单酶切原始PGADT7载体并回收酶切载体备用；

步骤3)，将步骤1)合成的碱基序列1、碱基序列2和碱基序列3连接到步骤2)得到的酶切载体中，得到三种重组载体。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述步骤2)中，用PCR产物回收试剂盒回收酶切载体。

4.一种采用权利要求1所述重组载体的用于高效酵母双杂交三框文库的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤a，双链cDNA制备：提取总RNA，分离出mRNA，经逆转录PCR合成单链cDNA，再通过LD-PCR以单链cDNA扩增获得双链cDNA；

步骤b，构建重组载体：在原始PGADT7载体分别插入碱基序列1、碱基序列2和碱基序列3构建三种重组载体；

步骤c，重组产物的制备，将步骤a得到的双链cDNA与等摩尔比混合的步骤b得到的三种重组载体的酶切载体进行infusine体外同源重组反应，得到重组产物；

步骤d，转化到大肠杆菌：将步骤c得到的重组产物转化到新鲜制备的大肠杆菌感受态细胞DH10b；

步骤e，文库测序鉴定。

5.根据权利要求4所述的用于高效酵母双杂交三框文库的构建方法，其特征在于，所述步骤a中，经LD-PCR后，还需要对PCR产物进行纯化。

6.根据权利要求4所述的用于高效酵母双杂交三框文库的构建方法，其特征在于，所述步骤b中，所述双链cDNA与等摩尔比混合的三种重组载体的酶切载体按照总摩尔比3:1的比例混合。