[发明专利]一种基于CRISPR技术检测目标突变的方法

权利要求书

1.一种基于CRISPR技术检测靶核酸是否存在目标突变位点的方法，其特征在于，所述方法包括将靶核酸与V型CRISPR/CAS效应蛋白、gRNA(指导RNA)和单链核酸检测器接触，所述gRNA包括与所述CRISPR/CAS效应蛋白结合的区域和与含有目标突变的突变型靶核酸杂交的导向序列，所述导向序列包括与所述目标突变位点配对的碱基；检测由CRISPR/CAS效应蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号；

与所述目标突变位点配对的碱基设置于gRNA导向序列的5’端第10位、第11位、第12位和第13位中的一个或多个位置。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述gRNA导向序列在非与所述目标突变位点配对的碱基处设置有突变的碱基，所述突变的碱基为与所述靶核酸相应位置不能杂交的碱基，所述突变的碱基的位置位于所述gRNA导向序列的5’端非第10位-13位；优选的，所述突变的碱基的位置位于所述gRNA导向序列的5’端第1位、第2位、第3位、第4位、第5位、第6位、第7位、第8位、第9位、第14位、第15位或第16位，更优选，5’端第1位、第2位、第6位、第7位、第8位或第9位。

3.一种基于CRISPR技术检测靶核酸在目标区域是否存在突变的方法，其特征在于，所述方法包括将靶核酸与V型CRISPR/CAS效应蛋白、gRNA(指导RNA)和单链核酸检测器接触，所述gRNA包括与所述CRISPR/CAS效应蛋白结合的区域和与野生型靶核酸杂交的导向序列；检测由CRISPR/CAS效应蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，

所述目标区域是指gRNA导向序列5’端第10位-第13位所靶向的靶核酸的位置。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述gRNA导向序列在5’端非第10位-13位的碱基处设置有突变的碱基，所述突变的碱基为与所述靶核酸相应位置不能杂交的碱基；优选的，所述突变的碱基的位置位于所述gRNA导向序列的5’端第1位、第2位、第3位、第4位、第5位、第6位、第7位、第8位、第9位、第14位、第15位或第16位，更优选，5’端第1位、第2位、第6位、第7位、第8位或第9位。

5.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述V型CRISPR/CAS效应蛋白为Cas12i蛋白，优选的，所述V型CRISPR/CAS效应蛋白包含SEQ ID No.1的序列，或者，所述V型CRISPR/CAS效应蛋白为SEQ ID No.1所示氨基酸序经过一个或多个(如2个、3个、4个，5个，6个，7个，8个，9个或10个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有基本相同功能的衍生蛋白；或者，所述V型CRISPR/CAS效应蛋白为与SEQ ID No.1所示的序列有80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％同一性的蛋白，优选的，所述V型CRISPR/CAS效应蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。

6.一种基于CRISPR技术检测靶核酸是否存在目标突变位点的试剂、试剂盒或组合物，其特征在于，所述试剂、试剂盒或组合物包括权利要求1-2任一权利要求中所述的V型CRISPR/CAS效应蛋白、gRNA(指导RNA)和单链核酸检测器。

7.一种基于CRISPR技术检测靶核酸在目标区域是否存在突变的试剂、试剂盒或组合物，其特征在于，所述试剂、试剂盒或组合物包括权利要求3-4任一权利要求中所述的V型CRISPR/CAS效应蛋白、gRNA(指导RNA)和单链核酸检测器，所述目标区域为gRNA导向序列5’端第10位-第13位所靶向的靶核酸的位置。

8.权利要求6或7所述的试剂、试剂盒或组合物在检测靶核酸是否存在目标突变位点，或者检测靶核酸在目标区域是否存在突变中的用途。

9.权利要求1-2任一权利要求中所述的V型CRISPR/CAS效应蛋白、gRNA(指导RNA)和单链核酸检测器在制备用于检测靶核酸是否存在目标突变位点的试剂、组合物或试剂盒中的用途。