[发明专利]蛹虫草菌活性RT-PCR检测引物和检测方法

权利要求书

1.一种蛹虫草菌活性RT-PCR检测引物，所述的检测引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.一种蛹虫草菌活性RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒内包括权利要求1所述的蛹虫草菌活性RT-PCR检测引物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒内还包括RT-PCR缓冲液、脱氧三磷酸核苷、ddH₂O、DNA聚合酶和cDNA合成反应体系。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的cDNA合成反应体系包括通用引物、脱氧三磷酸核苷、RT-PCR缓冲液、RNA酶抑制剂、逆转录酶和RNase free水。

5.一种蛹虫草菌活性RT-PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、提取待检测样品RNA；

S2、将待检测样品RNA加入cDNA合成反应体系中，进行cDNA合成；

S3、将合成的cDNA加入到RT-PCR反应体系中进行RT-PCR反应，与对照进行比较，检测蛹虫草菌株活性。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，cDNA合成反应体系中，各成分含量如下：

待检测样品RNA(100ng/μL)，1μL；Oligo Primer(0.1μg/μL)，1μL；dNTP Mixture(10mMeach)，1μL；5×RT Buffer，4μL；Rnase Inhibitor(40units/ul)，0.5μL；TUREscript H^-Rtase，1μL；RNase free H₂O，11.5μL。

7.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，cDNA合成的条件是42℃孵育50min；然后70℃加热5min。

8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，RT-PCR反应体系包括2.5μL 10×PCRBuffer，1μL dNTPs，正反向引物浓度为10μM，各加0.5μL，1μL cDNA，19μL ddH₂O，0.5μL Taq酶(2.5U/μL)。

9.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，RT-PCR反应条件为94℃5min；94℃30s，60℃30s，72℃50s，30个循环；72℃10min。