[发明专利]一种利用制备色谱从孕马尿中分离纯化结合雌激素的方法

说明书

本发明提供一种利用制备色谱从孕马尿中分离纯化天然孕马结合雌激素的方法，以孕马尿为原料，利用制备色谱分离纯化手段，采用极性基团修饰的硅胶填料，以有机溶剂为洗脱剂，制备得到无刺激性气味的天然孕马结合雌激素产品(质谱分析60个目标物均符合含量要求)。该方法工艺流程简单，重复性好，回收率高，溶剂消耗少，操作简便可控等特点，适用于生产化的分离和纯化。

技术领域

本方法涉及动物药用成分分离纯化技术领域，具体是一种利用制备色谱从孕马尿中分离纯化天然结合雌激素的方法。

背景技术

结合雌激素(conjugated estrogen hormone；conjugated estrogens，简称CE)是对最早从孕马尿(怀孕的母马尿液)中提取的多种天然固醇类水溶性结合态雌激素混合物的统称。临床上主要用于激素替代疗法，以缓解任何因雌激素不足引起的临床症状。它对于治疗妇女更年期综合症和卵巢切除后的常见病有独特疗效，还可以预防和治疗心脏病、老年骨质疏松症，具有激活身体机能、降低循环血脂水平，皮肤抗皱延缓衰老的功效。

随着社会的进步和人口的老龄化，越来越多的妇女追求生活的高质量，安全、有效的雌激素类产品。欧洲50％以上，美国30％以上的更年期女性应用激素替代疗法，结合雌激素在全球雌激素补充市场上占有近80％的份额。该产品在世界上已有近70年用药史，英文商品名为Premarin，中文名为倍美力。

自1942年在美国首次上市以来长盛不衰。尽管有众多的合成雌激素药品，但孕马来源的天然结合雌激素在激素补充疗法中的地位是无以替代的。

每升孕马尿中富含雌激素的平均含量为70～130mg，每匹孕马在孕期内可形成雌激素5～100g。孕马尿中含有大量的可溶性杂质，如无机盐、尿素、糖类、黄酮及异黄酮等、酚类及多酚类成分等，这些成分是孕马的代谢产物。同时还含有不可溶性杂质，如尿内存在的不溶性盐类，具体的如已经产生的沉淀及存放过程中产生的沉淀：碳酸钙、碳酸氢钙、磷酸钙、磷酸氢钙等钙盐碳酸盐、草酸盐等。以上这些杂质的干扰会影响雌激素的纯化分离。

目前大部分工艺是采用萃取法及沉淀法，极性大孔吸附树脂或离子交换树脂进行分离纯化结合雌激素，目前已有很多相关专利公开树脂纯化方法，但其缺点是大孔树脂机械强度低，容易破碎，回收次数少，工艺不稳定，回收率低，用水量大，污染严重。随着新的技术和材料的开发，孕马尿的分离纯化需要不断优化调整以适应市场需求。

鉴于以上技术背景及发展前景，提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从孕马尿中分离纯化结合雌激素的方法，该方法的原理是依靠固定相表面吸附作用，将结构类似的混合物中的组分在固定相中、随着流动相移动的迁移速度不同，从而按一定的次序由固定相中流出，根据色谱图接取目标馏分即可得到高纯度产品。

为了实现上述发明目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明所述的一种利用制备色谱对孕马尿进行分离纯化的方法，采用色谱的分离机理，对结合雌激素使用有机溶剂混合溶液洗脱，收集结合雌激素目标解析液。

本发明所述的一种利用制备色谱对孕马尿进行分离纯化结合雌激素的方法，其特征在于：色谱分离模式所用的填料为极性基团修饰的HC系列耐纯水硅胶填料，采用极性共聚键合技术，其中与硅胶连接的烷基链长度可调节，其范围为C4～C18，键合量为0.8～5.0μmol/m²，对结合雌激素具有很好的富集效果，其粒径为10μm～100μm，孔径为

本发明所述的一种利用制备色谱对孕马尿进行分离纯化结合雌激素的方法，其特征在于：作为优选制备色谱条件，孕马尿的上样体积为10～200倍柱体积。

作为优选制备色谱条件，分离温度为15～50℃。

本发明所述一种利用制备色谱对孕马尿进行分离纯化结合雌激素的方法，其特征在于：依据色谱图收集目标解析液。