[发明专利]一株分泌替加环素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株分泌替加环素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测技术领域。本发明分泌替加环素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC03，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19176。利用该菌株分泌获得的替加环素单克隆抗体用于进行替加环素血药浓度的分析检测。本发明获得的替加环素单克隆抗体细胞株可以用于免疫分析检测，其对替加环素有较好的检测灵敏度和特异性（IC₅₀值为2.3ng/mL、对替加环素类似物交叉率小于10%，交叉率=（替加环素的IC₅₀/类似物的IC₅₀）×100%。

技术领域

本发明涉及一株分泌替加环素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测技术领域。

背景技术

替加环素（tigecycline），是一种静脉给药的广谱甘氨酰环肽类抗生素，属于第三代四环素类抗生素，2005年6月美国FDA批准该药用于成人复杂皮肤及软组织感染和成人复杂的腹内感染。替加环素是继多西环素、米诺环素、美他环素后开发的新一代四环素类抗生素。与四环素相比，在中央的骨架的侧链上，在第9位以D环甘氨酰环代替了N-烷基-甘氨酰氨基，使抗菌谱更广，抗菌活性更强，而且使它得以能克服大多数细菌对四环素耐药机制的产生。但是，TGC通过静脉输注进入人体后分布广泛，将导致体内血浆浓度低，而且此药有增加总死亡率的风险，因此在使用替加环素时应对血药浓度进行检测。

对于替加环素血药浓度的检测，常采用高效液相色谱法、气相色谱法、气相或液相色谱质谱联用法。但这些方法存在样品前处理复杂和检测时间长等不足，不适用于快速检测，因此，有必要建立一种针对替加环素的高效、快速的检测方法。

酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、纯化步骤少、分析容量大、检测成本低而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，因此得到了广泛应用。而使用酶联免疫法检测替加环素的前提是得到对替加环素具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对替加环素具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处，提供一株分泌替加环素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。此杂交瘤细胞株分泌的替加环素单克隆抗体对替加环素具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为2.3ng/mL），可以用于建立替加环素的免疫学检测方法，检测替加环素的血药浓度。

本发明的技术方案，一株分泌替加环素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC03，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19176。

本发明提供了上述一株分泌替加环素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC03的制备方法，包含如下步骤：

（1）使用替加环素半抗原制备替加环素完全抗原，将获得的替加环素完全抗原制备成含抗原弗氏佐剂与含抗原不完全弗氏佐剂；

（2）将得到的含抗原弗氏佐剂通过背部皮下注射，注射进入BALB/c小鼠体内进行多次免疫，首次免疫采用含抗原完全弗氏佐剂，加强免疫采用含抗原不完全弗氏佐剂；

（3）将经过上述免疫过程的小鼠进行采血，通过间接ELISA检测小鼠血清免疫效价和免疫抑制能力，筛选出血清中替加环素抗体含量高的获得免疫的小鼠；

（4）将筛选出的小鼠用含抗原不完全弗氏佐剂再进行最后一次加强免疫，然后通过腹腔注射进行冲刺免疫，冲刺免疫采用不含弗氏佐剂的替加环素完全抗原进行；