[发明专利]一株分泌替加环素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用有效
| 申请号： | 202011402073.5 | 申请日： | 2020-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN112375745B | 公开（公告）日： | 2022-03-15 |
| 发明（设计）人： | 胥传来;路倩倩;匡华;徐丽广;孙茂忠;刘丽强;宋珊珊;吴晓玲;郝昌龙;胡拥明 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C07K16/44;C07K14/795;C07K14/77;C07C237/48;G01N33/577;C12R1/91 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 时旭丹;张仕婷 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分泌 替加环素 单克隆抗体 杂交瘤 细胞株 及其 应用 | ||
1.一株分泌替加环素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC03，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCCNo.19176。
2.替加环素单克隆抗体，其特征在于：它由权利要求1所述保藏编号为CGMCC No.19176的单克隆细胞株ABC03分泌产生。
3.一种替加环素完全抗原，其特征在于：简称为TGC-NH2-KLH，分子式
如下：
。
4.一种替加环素包被原，其特征在于：简称为TGC-NH2-OVA，分子式如下：
。
5.权利要求3所述替加环素完全抗原的制备方法，其特征在于：将替加环素半抗原TGC-NH2溶于无水N，N-二甲基甲酰胺DMF中，加入HCl冰浴避光反应；加入过量的NaNO2反应得到A液；将钥孔血蓝蛋白KLH用碳酸盐缓冲溶液CBS稀释，得到B液；将A液加入到B液中进行反应，得到反应液；用磷酸盐缓冲液PBS透析反应液，得到替加环素完全抗原TGC-NH2-KLH。
6.根据权利要求5所述替加环素完全抗原的制备方法，其特征在于：称取11.42mg替加环素半抗原TGC-NH2溶于无水N，N-二甲基甲酰胺DMF中，加入57 μL 1M HCl冰浴避光反应，30 min后加入过量的NaNO2反应30min，得到A液；将6mg 钥孔血蓝蛋白KLH用0.01M碳酸盐缓冲溶液CBS稀释至3mg/mL，得到B液；将A液加入到B液中进行反应2h，得到反应液；用0.01M磷酸盐缓冲液PBS透析反应液，得到替加环素完全抗原TGC-NH2-KLH。
7.权利要求4所述替加环素包被原的制备方法，其特征在于：称取替加环素半抗原TGC-NH2溶于无水N，N-二甲基甲酰胺DMF中，加入HCl冰浴避光反应，加入过量的NaNO2反应，得到A液；将鸡卵白蛋白OVA用0.01M碳酸盐缓冲溶液CBS稀释，得到B液；将A液加入到B液中进行反应，得到反应液；用磷酸盐缓冲液PBS透析反应液，得到替加环素包被原TGC-NH2-OVA。
8.根据权利要求7所述替加环素包被原的制备方法，其特征在于：称取8.72mg替加环素半抗原TGC-NH2溶于无水N，N-二甲基甲酰胺DMF中，加入32 μL 1M HCl冰浴避光反应，30min后加入过量的NaNO2反应30min，得到A液；将6mg 鸡卵白蛋白OVA用0.01M碳酸盐缓冲溶液CBS稀释至3mg/mL，得到B液；将A液加入到B液中进行反应2h，得到反应液；用0.01M磷酸盐缓冲液PBS透析反应液，得到包被原TGC-NH2-OVA。
9.权利要求2所述替加环素单克隆抗体的应用，其特征在于：将其应用于替加环素血药浓度的分析检测。
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