[发明专利]一种筛选双孢蘑菇A15菌株耐高温菌株的引物及方法在审
| 申请号： | 202011383764.5 | 申请日： | 2020-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN112280891A | 公开（公告）日： | 2021-01-29 |
| 发明（设计）人： | 陈辉;张津京;黄建春;王倩;陈明杰 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 苏州翔远专利代理事务所(普通合伙) 32251 | 代理人： | 王华 |
| 地址： | 200000 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 蘑菇 a15 菌株 耐高温 引物 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种筛选双孢蘑菇A15菌株耐高温菌株的引物，其特征在于：所述引物的序列为：
9486-2F2：AACTAACTAACACACCAA；
9486-2R2：TTGGTGTGTTAGTTAGTT。
2.一种筛选双孢蘑菇A15菌株耐高温菌株的方法，其特征在于：包括下列步骤：
步骤1：提取A15菌株DNA
将待检测的双孢蘑菇A15菌株在PDA平板上进行培养，然后挑取菌丝，用DNA裂解液对挑取的菌丝进行裂解，得到菌丝裂解液；
步骤2：PCR扩增
以菌丝裂解液作为PCR扩增的模板，使用权利要求1所述的引物9486-2F2和9486-2R2进行PCR扩增；
步骤3：如果可以扩增出产物大小为388bp的条带，则其为耐高温菌株，反之则为不耐高温菌株。
3.根据权利要求2所述的筛选双孢蘑菇A15菌株耐高温菌株的方法，其特征在于：PCR扩增程序为：94℃预变性5min，95℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环，72℃，10min，4℃保存。
4.根据权利要求2所述的筛选双孢蘑菇A15菌株耐高温菌株的方法，其特征在于：PCR扩增体系为：总体积为20μl，包括10μl 的PCR mix，7ul的双蒸水，1ul的引物9486-2F2，1ul的引物9486-2R2和1ul的菌丝裂解液。
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