[发明专利]植物中花青素类化合物的液质联用分析方法

说明书

本发明涉及一种植物中花青素类化合物的液质联用分析方法，包括如下步骤：制备待测植物样品溶液，在特定的色谱条件和质谱条件下采用LC‑MS/MS检测分析，根据花青素类化合物的定性Q1/Q3离子对和保留时间，确定待测植物中是否含有花青素类化合物。该液质联用分析方法可适用于不同植物样本中花青素类物质的快速分析。

技术领域

本发明涉及检测分析技术领域，尤其涉及一种植物中花青素类化合物的液质联用分析方法。

背景技术

花青素(anthocyanidin)是一类广泛存在于植物中的水溶性色素，属于类黄酮化合物，也是植物的主要呈色物质；花青素作为一种天然食用色素，安全、无毒、资源丰富，而且具有一定营养和药理作用，在食品、化妆、医药等方面有着巨大的应用潜力。有实验表明，花青素是迄今为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有保健功能，近年来也越来越受到关注。自然条件下游离的花青素极少见，主要以糖苷形式存在，常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等结合成花色苷(anthocyanin)；且从植物中分离出的花青素极不稳定，易受酸碱度、温度、自身浓度、光、氧、酶、辅因子、微生物和金属离子等的影响而降解。

目前已发现的花青素类物质有500多种，其多样性赋予花青素广泛的生物活性，但同时也增加了其分析鉴定的难度。目前，常用于花青素类物质分析的方法主要有紫外－可见光谱法、高效液相色谱法(HPL)、质谱技术(MS)、核磁共振波谱法(NMR)、纸层析法(PC)、薄层层析法(TLC)、毛细管区带电泳法(PCE)、红外吸收光谱法(IR)和近红外吸收光谱法(NIR)等，这些方法均有各自的优势和局限性。

目前，商业化的花青素类物质标准品较少，因此，通常无法直接通过绝对定量的方式对植物中的花青素类物质进行一一定量检测分析。

HPLC-MS结合了高效液相色谱的强分离能力与质谱的强鉴定能力，具有分析结果准确、检出限低的特点，克服了花色苷标准品缺少问题，适用于低含量花青素的定性和定量检测，广泛用于结构复杂的花青素，如原矢车菊素、原花青素、原花翠素和单宁等结构的鉴定与分析。有研究利用HPLC-MS 发现，紫玉米中主要存在6种花青素，分别为矢车菊色素-3-葡萄糖苷、天竺葵色素-3-葡萄糖苷、芍药色素-3-葡萄糖苷及与这3种花青素相应的丙二酸盐衍生物。不过，由于花青素仅在低pH条件下(pH3)比较稳定，而低 pH值将抑制电喷雾质谱的离子化，这影响了质谱分析的效果，导致该联用技术的应用受到限制。

发明内容

基于此，有必要提供一种花青素类化合物的液质联用分析方法，能够适用于不同植物样本中花青素类物质的快速定性及半定量分析。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

本发明提供一种植物中类花青素类化合物的液质联用分析方法，包括如下步骤：

确定采用LC-MS/MS检测分析的参数条件，色谱条件：采用反向色谱柱，柱温30℃～35℃，流动相A为含0.1％～1％甲酸的水溶液，流动相B为含 0.1％～1％甲酸的乙腈溶液，采用梯度洗脱方式；质谱条件：采用正离子模式和MRM扫描模式；

制备待测植物样品溶液，按照所述色谱条件和所述质谱条件上机测试；

根据花青素类化合物的至少两对定性Q1/Q3离子对信息确定待测植物中是否含有花青素类化合物。

若待测植物中含有花青素类化合物，则采用花青素类化合物标准品，建立标准曲线法测定所述待测植物中花青素类化合物的含量。

优选地，所述反向色谱柱为BEH C18柱，所述柱温为35℃，所述流动相A为含0.1％～1％甲酸的水溶液，流动相B为含0.1％～1％甲酸的乙腈溶液，所述梯度洗脱程序为：

0min，流动相A与流动相B的体积比为95:5；

6min，流动相A与流动相B的体积比为50:50；