[发明专利]评估用于施用的转导T细胞的适用性的方法

说明书

本发明的发明名称是评估用于施用的转导T细胞的适用性的方法。本发明涉及分析对转导T细胞目的用于施用给受试人有用的载体上清液。本发明还涉及分析转导T细胞目的用于施用给受试人的方法。本发明提供了分析基因修饰的T细胞以检测污染物的方法，其中基因修饰的T细胞包括编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区和信号传导结构域。在一个实施方式中，污染物是选自内毒素、支原体、具有复制能力的慢病毒(RCL)、p24、VSV‑G核酸、HIV gag、残留的抗‑CD3/抗‑CD28包被的珠、小鼠抗体、混合的人血清、牛血清白蛋白、牛血清、培养基组分、载体包装细胞或质粒组分、细菌和真菌中的至少一种。

本申请是分案申请，原申请的申请日为2013年7月12日、申请号为2013800476399、发明名称为“评估用于施用的转导T细胞的适用性的方法”。

关于联邦资助的研究或开发的声明

本发明在美国国立卫生研究院(NIH)给予的资助号K24CA11787901、1PN2-EY016586、1R01CA105216、1R01CA120409、RO1AI057838和R01113482下利用政府支持完成。政府拥有本发明中的某些权利。

相关申请的交叉引用

本申请要求2012年7月13日提交的美国临时申请号61/671,495的优先权，其内容在此通过引用以其全部并入本文。

背景技术

大部分具有B-细胞恶性肿瘤——包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)的患者，将死于他们的疾病。治疗这些患者的一个方法是基因修饰T细胞以通过嵌合抗原受体(CAR)的表达靶向在肿瘤细胞上表达的抗原。CAR为设计来以人白细胞抗原-非依赖性的方式识别细胞表面抗原的抗原受体。利用表达CAR的基因修饰细胞治疗这些类型患者的尝试已经得到非常有限的成功。见例如，Brentjens等,2010,Molecular Therapy,18:4,666-668；Morgan等,2010,Molecular Therapy,2010年2月23日在线公布,1-9页；和Till等,2008,Blood,112:2261-2271。

尽管CAR可以以类似于内源T-细胞受体的方式引发T-细胞活化，但至今该技术的临床应用的主要阻碍已经限于CAR+T细胞的体内扩展、注入后细胞的快速消失和令人失望的临床活性(Jena等,Blood,2010,116:1035-1044；Uckun等,Blood,1988,71:13-29)。产生用于施用给人的基因修饰的T细胞的方法具有产生不需要的污染物的可能性，所述污染物可在施用后对基因修饰的T细胞的持续和功能造成负面影响。

因此，在本领域中需要通过检测可以对基因修饰细胞的持续和功能造成负面影响的污染物，分析用于施用给受试人的转导T细胞的适用性。本发明满足了该需要。

发明内容

本发明提供了分析基因修饰的T细胞以检测污染物的方法，其中基因修饰的T细胞包括编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区和信号传导结构域。

在一个实施方式中，基因修饰的T细胞通过用慢病毒载体转导被基因修饰。

在一个实施方式中，污染物是选自内毒素、支原体、具有复制能力的慢病毒(RCL)、p24、VSV-G核酸、HIV gag、残留的抗-CD3/抗-CD28包被的珠、小鼠抗体、混合人血清、牛血清白蛋白、牛血清、培养基组分、载体包装细胞或质粒组分、细菌和真菌中的至少一种。

在一个实施方式中，细菌是选自粪产碱菌、白色念珠菌、大肠杆菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎双球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和酿脓链球菌A群中的至少一种。

在一个实施方式中，信号传导结构域是CD3ζ信号传导结构域。

在一个实施方式中，抗原结合结构域是抗体或其抗原-结合片段。