[发明专利]基于多靶标组合的肿瘤干细胞的富集和筛选方法有效
| 申请号： | 202011248414.8 | 申请日： | 2020-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN112410302B | 公开（公告）日： | 2023-02-17 |
| 发明（设计）人： | 王子华;胡志远 | 申请（专利权）人： | 福建医科大学 |
| 主分类号： | C12N5/095 | 分类号： | C12N5/095;C12N13/00 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 黄爽 |
| 地址： | 350122 福建省福州市大*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 靶标 组合 肿瘤 干细胞 富集 筛选 方法 | ||
1.多肽-磁性纳米颗粒，其特征在于，所述多肽-磁性纳米颗粒为偶联有靶向肿瘤干细胞标志物CD133、EpCAM和CD13的多肽的氧化铁磁性纳米颗粒；
所述多肽为Pep-1和Pep-2，它们的氨基酸序列如SEQ ID NO:1-2所示。
2.根据权利要求1所述的多肽-磁性纳米颗粒，其特征在于，所述多肽-磁性纳米颗粒是由所述多肽的半胱氨酸侧链上的巯基与表面修饰有聚乙二醇马来酰亚胺基团的氧化铁磁性纳米颗粒通过迈克尔加成反应得到的。
3.根据权利要求2所述的多肽-磁性纳米颗粒，其特征在于，所述表面修饰有聚乙二醇马来酰亚胺基团的氧化铁磁性纳米颗粒的粒径大小为50-300nm。
4.根据权利要求3所述的多肽-磁性纳米颗粒，其特征在于，所述表面修饰有聚乙二醇马来酰亚胺基团的氧化铁磁性纳米颗粒的粒径大小为200nm。
5.多肽-磁性纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括：
(1)采用固相肽合成方法合成多肽，得到多肽溶液；
(2)制备表面修饰有聚乙二醇马来酰亚胺基团的氧化铁磁性纳米颗粒溶液；
(3)将(1)的多肽溶液和(2)的氧化铁磁性纳米颗粒溶液混合孵育；
其中，所述多肽为靶向肿瘤干细胞标志物CD133、EpCAM和CD13的多肽；所述多肽为Pep-1和Pep-2，它们的氨基酸序列如SEQ ID NO:1-2所示。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述多肽溶液与所述氧化铁磁性纳米颗粒溶液在25-37℃混合振荡4-24h；
其中，振荡转速为200-250rpm。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，氧化铁磁性纳米颗粒和多肽的质量比为1:0.05-1；和/或
所述多肽同权利要求1-4中任一项所述。
8.权利要求1-4任一项所述多肽-磁性纳米颗粒或按照权利要求5-7任一项所述方法制备的多肽-磁性纳米颗粒在肿瘤干细胞的富集和筛选中的应用。
9.基于多靶标组合的肿瘤干细胞的富集和筛选方法，其特征在于，包括：
1)将肿瘤细胞进行体外成球培养，然后将成球细胞消化成单细胞悬液；
2)向1)的单细胞悬液中加入权利要求1-4任一项所述多肽-磁性纳米颗粒或按照权利要求5-7任一项所述方法制备的多肽-磁性纳米颗粒，在外加磁场的作用下进行分选。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述肿瘤细胞选自肝癌、神经胶质瘤、非小细胞肺癌、结直肠癌、胰腺癌。
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