[发明专利]一种制备2-氨基-3-取代苯基-3-羟基丙酸的生物酶催化流式工艺

权利要求书

1.一种制备2-氨基-3-取代苯基-3-羟基丙酸的生物酶催化流式工艺，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、在磷酸缓冲液中将醛缩酶固定至大孔吸附树脂上，得到固定化醛缩酶；其中，醛缩酶为基因改造醛缩酶，利用工程酶Cc-H91A178对新月柄杆菌醛缩酶位点进行突变，其中91位由组氨酸变更为丙氨酸，178位由丙氨酸变更为酪氨酸；新月柄杆菌醛缩酶的序列为SEQID NO：1所示，工程酶Cc-H91A178的序列为SEQ ID NO：2所示；其中，磷酸缓冲液浓度为0.1M～1M，PH为7～8，配制成含醛缩酶10mg～300mg/L的酶溶液；大孔吸附树脂包括D301、ZGA451或DX110，醛缩酶和大孔吸附树脂的添加比例为1000U/g～5000U/g；固定化温度为4～10℃，固定化时间为12～24h；

(2)、甘氨酸溶于水中，再加入取代苯甲醛和二价金属离子酶促剂，调节PH，得到溶液；在酶催化固定床中填充步骤(1)制备的固定化醛缩酶，将配制的溶液在一定温度下以一定流速流过酶催化固定化床，收集流出液，得到反应混合物溶液；其中，以水为溶剂，二价金属离子为酶促剂，固定化醛缩酶为催化剂，取代苯甲醛和甘氨酸为原料底物进行反应，合成路线如下：

R＝H,Cl,Br,F,NO₂,MeSO₂,OH

；其中，取代苯甲醛质量为溶剂质量的0.5～3％，取代苯甲醛和甘氨酸的摩尔比为1：1～3.5，固定化醛缩酶体积为溶剂体积的0.2％～5％；二价金属离子酶促剂包括Ni²⁺、Co²⁺、Zn²⁺或Fe²⁺的盐酸盐或硫酸盐，添加比例为取代苯甲醛的0.01mol％～2mol％；PH为6～9，温度为35～65℃，流速为100～800BV/h；

(3)、将步骤(2)得到的反应混合物溶液和水分别通过填充有络合树脂的分离固定床分离成甘氨酸稀溶液和2-氨基-3-取代苯基-3-羟基丙酸稀溶液，二价金属离子酶促剂被分离固定床的络合树脂吸附除去；其中，分离固定床中填充的络合树脂包括HZ930、XAX7或ZGC107MB；络合树脂和反应混合物溶液的体积比为1:1～1.5，反应混合物溶液流速为10～30BV/h，络合树脂和水的体积比为1:2～4，水流速为10～30BV/h；前1～2倍络合树脂体积的流出液为甘氨酸稀溶液，其后的流出液为2-氨基-3-取代苯基-3-羟基丙酸稀溶液；

(4)、甘氨酸稀溶液浓缩后回收套用到步骤(2)中，2-氨基-3-取代苯基-3-羟基丙酸稀溶液浓缩后，降温析晶、真空干燥后得到2-氨基-3-取代苯基-3-羟基丙酸成品；其中，在浓缩过程中产生的水将重新回套至步骤(3)分离步骤；析晶温度为-5～10℃，析晶时间为10～20h，50～80℃下真空干燥。