[发明专利]一种儿茶酚胺及其代谢物检测试剂盒和检测方法

说明书

本申请公开了一种儿茶酚胺及其代谢物检测试剂盒和检测方法，特别是用于尿液中儿茶酚胺及其代谢物的检测，所述试剂盒包括稀释液、洗脱液。通过对预处理后的含有同位素内标物的尿液样本，进行液相色谱‑质谱检测，将得到的检测数据与标准曲线对照，该试剂盒能同时测定儿茶酚胺及其代谢物共6个化合物的含量，提高了检测的时效性并降低经济成本，能够满足临床液质检测需求。

技术领域

本申请涉及一种儿茶酚胺及其代谢物检测试剂盒和检测方法，属于分析化学及临床检验技术领域。

背景技术

嗜铬细胞瘤起源于肾上腺髓质嗜铬细胞，分泌产生儿茶酚胺，包括多巴胺(DA)、肾上腺素(E)和去甲肾上腺素(NE)；副神经节瘤起源于肾上腺外嗜铬细胞，位于胸、腹和盆腔脊柱旁交感神经链，二者总称PPGLs(pheochromocytomas or paragangliomas)，是继发性高血压的少见类型，在普通门诊高血压患者中的患病率为0.2％～0.6％。副神经节瘤的临床表现多为顽固性高血压，有的患者伴有发作性多汗、心悸、头痛、震颤、皮肤苍白等症状和/或体位性低血压；有的首发症状为麻醉时出现高血压或高血压危象；有的患者可因严重心血管并发症而致死亡。

儿茶酚胺及其代谢物的测定是定性诊断PPGL的主要方法，包括DA、E和NE及其中间代谢产物，3-甲氧酪胺(3-MT)、变肾上腺素(MN)和去甲变肾上腺素(NMN)，MN和NMN合成MNs。《嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗的专家共识》推荐诊断PPGL的首选生化检测为测定血游离血浆游离MNs，其次可检测血或尿DA、E和NE浓度。另外，3-MT被认为是识别嗜铬细胞瘤有无转移的重要标志，而对于个别只分泌DA的PPGL可以检测血浆或尿液DA及其代谢产物3-MT的水平。

现有儿茶酚胺及其代谢物的测定方法主要为免疫测定和液相色谱串联质谱法测定。使用液相串联质谱联用技术可以在复杂基质如人血浆和尿液中获得更高的灵敏度和特异性，可以降低对继发性高血压的误诊率，减少进一步检测(如影像学检测)的必要；同时液相色谱串联质谱技术可以分离干扰和结构相似的化合物；但目前缺乏能够同时检测6个儿茶酚胺及其代谢物的方法。而免疫测定则可能遭受来自类肾上腺素化合物的交叉反应干扰，导致错误的结果。

发明内容

根据本申请的一个方面，提供了一种儿茶酚胺及其代谢物检测试剂盒和检测方法，特别是用于尿液中儿茶酚胺及其代谢物的检测，通过对预处理后的含有同位素内标物的尿液样本，进行液相色谱-质谱检测，将得到的检测数据与标准曲线对照，该试剂盒能同时测定儿茶酚胺及其代谢物共6个化合物的含量，提高了检测的时效性并降低经济成本，能够满足临床液质检测需求。

一种儿茶酚胺及其代谢物检测试剂盒，所述试剂盒包括稀释液、洗脱液。

可选地，稀释液包括乙酸铵；

洗脱液包括甲酸。

可选地，稀释液为50～500mM的乙酸铵水溶液；

洗脱液为甲酸溶液；

甲酸溶液中，甲酸的体积分数为0.1％～10％；

优选地，洗脱液为含体积分数为0.1％～10％甲酸的乙腈和/或含体积分数为0.1％～10％甲酸的甲醇。

可选地，试剂盒中还包括活化剂和清洗液；

活化剂包括甲醇、水中的至少一种；

清洗液包括乙酸铵、有机溶剂中的至少一种。

可选地，清洗液包括浓度为10～100mM的乙酸铵水溶液；

有机溶剂选自甲醇、乙腈、异丙醇中的至少一种。

可选地，试剂盒中还包括同位素内标物和/或同位素内标物溶液；

同位素内标物包括儿茶酚胺及其代谢物的¹³C标记物或氘代标记物；