[发明专利]一种筛选新生抗原或新生抗原编码序列的方法

权利要求书

1.一种筛选新生抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将待筛选新生抗原编码序列插入到原始表达载体中获得重组表达载体，

步骤(1)在原始表达载体中插入有多条新生抗原编码序列，各条新生抗原编码序列之间及首、尾新生抗原编码序列与原始表达载体之间均通过柔性接头编码序列连接，

步骤(1)中所述原始表达载体在新生抗原编码序列插入的位点之前具有kozak序列，kozak序列的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，

步骤(1)中所述原始表达载体在kozak序列与新生抗原编码序列插入的位点之间还具有泛素蛋白编码基因序列，泛素蛋白编码基因序列的碱基序列如SEQ ID NO.4所示，

步骤(1)中所述原始表达载体在kozak序列与泛素蛋白编码基因序列之间还具有信号肽编码序列，信号肽编码序列的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，

(2)将步骤(1)重组表达载体转染未成熟的DC细胞，

(3)培养转染后的DC细胞使DC细胞成熟，成熟的DC细胞表面表达有相应的新生抗原表位肽，

(4)由步骤(3)成熟的DC细胞将新生抗原表位肽递呈给T细胞，诱导T细胞活化为效应T细胞，

步骤(4)中活化后的效应T细胞进行扩增，

(5)将步骤(4)效应T细胞与肿瘤细胞共培养，筛选杀伤肿瘤细胞效果好的效应T细胞，从而筛选出免疫原性好的新生抗原。

2.一种筛选新生抗原编码序列的方法，其特征在于，按权利要求1筛选新生抗原的方法筛选出免疫原性好的新生抗原，对应的编码序列即为筛选到的免疫原性好的新生抗原编码序列。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)在原始表达载体中插入1～50条新生抗原编码序列。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，第一条新生抗原编码序列的上游端连接有起始柔性接头编码序列，相邻两条新生抗原编码序列之间连接有中间柔性接头编码序列，最后一条新生抗原编码序列的下游端连接有末尾柔性接头编码序列，其中，起始柔性接头编码序列编码的氨基酸序列为GGSGGGSGG，中间柔性接头编码序列编码的氨基酸序列为GGSGGGGSGG，末尾柔性接头编码序列编码的氨基酸序列为GGSLGGGGSG。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，原始表达载体中插入多条新生抗原编码序列，先筛选出具有较好免疫原性的新生抗原所对应的重组表达载体，再针对该重组表达载体中的多条新生抗原编码序列分别验证所编码新生抗原的免疫原性，筛选出免疫原性好的新生抗原。