[发明专利]金纳米笼的制备方法及其应用

说明书

本发明属于CAR‑T活体CT成像技术领域，具体公开了金纳米笼的制备方法及其应用。金纳米笼的制备方法为配制CF₃COOAg母液；配制聚乙烯吡咯烷酮母液；配制盐酸母液；配制NaHS母液，取NaHS母液，盐酸乙二醇母液，乙烯吡咯烷酮母液，CF₃COOAg母液反应；将前述步骤所得反应产物转移至离心管中，加入丙酮溶液洗涤纯化，产物再加水分散，离心去上清，洗涤，得到银纳米立方溶液；采用电化学置换法制备金纳米笼。将金纳米笼在CAR‑T活体CT成像剂中进行应用。本发明具有的有益效果是：不易造成细胞因子风暴；通过电转，可一次性对CAR‑T转染，操作流程简单，CAR‑T通过CT成像，具有高衬度，高特异性优点。

技术领域

本发明属于CAR-T活体CT成像技术领域，尤其涉及成像用金纳米笼的制备及应用方法。

背景技术

CAR-T细胞治疗是通过基因工程技术使T细胞表达某些共刺激分子和靶向结合特异性肿瘤抗原的嵌合受体，从而具备进一步活化并对特定肿瘤细胞进行精准杀伤的能力。CAR-T用量过大，会导致细胞因子风暴产生，用量不足，则对白血病治疗效果不加。因此，有必要采取有效手段，监测CAR-T的体内行为。

目前，常用的CAR-T示踪方法为报告基因转染，专利201710648782.3公开了一种体内示踪和人工示踪CAR-t的标签和应用的方法。该方法需要构建慢病毒质粒，对CAR-T进行二次转染。不适用于其他CAR-T的标记。专利201911324560.1公开了一种靶分子标签，通过氨基标记至CAR-T，随后在体内注入核素标签，核素标签于CAR-T结合，进一步通过PET/CT对CAR-T成像。该方法虽然对CAR-T成像精度较高，但是操作繁琐，需要对CAR-T进行二次标记。并且二标在体内如未完全代谢，有风险形成假阳性结果。又如专利20201012290.8公开了一种双色荧光系统活化CAR-T细胞示踪的方法，该方法通过两次转染慢病毒，使CAR-T细胞表达两种颜色荧光。该方法虽然可以通过两种荧光监测对体内CAR-T示踪，或对活化CAR-T示踪，但是多次转染增加了制备流程，并且该方法选用的蛋白表的荧光的穿透力较差，不能很好地在组织中传播，对深部组织的成像可能出现假阴性，只适合小动物实验或者浅表部位信号的探测，限制了该成像方法的临床转化。

发明内容

针对上述问题，本发明提供金纳米笼的制备方法及其应用，主要解决了现有技术容易造成细胞因子风暴，需要二次转染，穿透力较差，不能适用于不同的CAR-T标记等问题。

为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：

金纳米笼的制备方法，

将CF₃COOAg溶于乙二醇，配制CF₃COOAg母液；称取聚乙烯吡咯烷酮溶于乙二醇，配制成聚乙烯吡咯烷酮母液；

移取浓盐酸与乙二醇混合，配制盐酸母液；取NaHS加入到乙二醇中，配制NaHS母液，

在150℃-200℃条件下，取NaHS母液，盐酸乙二醇母液，乙烯吡咯烷酮母液，CF₃COOAg母液反应；

将前序步骤所得反应产物转移至离心管中，加入丙酮溶液洗涤纯化，所得产物再加入超纯水超声分散，离心去上清，洗涤，得到银纳米立方溶液；

采用电化学置换法制备金纳米笼。

一种方式，A.将CF₃COOAg溶于乙二醇，配制成浓度为10-500mg/mL的CF₃COOAg母液；取聚乙烯吡咯烷酮溶于乙二醇，配制成20mg/mL的聚乙烯吡咯烷酮母液；

移取浓盐酸与乙二醇混合，配制成2.5mmol/L的盐酸母液；称取NaHS加入到乙二醇中，配制成浓度为1-100mg/mL的NaHS母液，