[发明专利]产褐藻胶裂解酶菌株、褐藻胶裂解酶及其应用

说明书

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及产褐藻胶裂解酶菌株、褐藻胶裂解酶及其应用。本发明提供了一种产褐藻胶裂解酶菌株HB182678，该菌株的分类为红树林球菌属(Mangrovicoccus)，该菌所产的褐藻胶裂解酶具有较广泛的pH稳定性。本发明还提供了一种褐藻胶裂解酶及其制备方法，以及上述菌株HB182678和褐藻胶裂解酶在降解褐藻中的应用，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及产褐藻胶裂解酶菌株、褐藻胶裂解酶及其应用。

背景技术

褐藻酸是由古罗糖醛酸(guluronic acid，G)及甘露糖醛酸(mannuronic acid，M)通过β-1,4糖苷键连接形成的线性高分子，是褐藻细胞壁的主要成分，广泛存在于海带、马尾藻、巨藻等褐藻细胞中。通过酶法降解制备的褐藻寡糖具有多种生理活性，如促生长、增强免疫、神经保护、抗炎、抗病毒等，在食品、药品、农业、保健品、化妆品等领域具有广泛的应用价值。酶解法反应条件温和、效率高、底物专一性强，不会产生对人体和环境有害的副产物，逐渐成为工业降解褐藻胶生产褐藻寡糖的主要手段。

褐藻胶裂解酶是多糖裂解酶的一种，可通过β-消除反应将褐藻胶降解为在非还原端具有双键的不饱和寡糖。根据底物特异性，褐藻胶裂解酶可分为G 嵌段特异性裂解酶(poly G)、M嵌段特异性裂解酶(polyM)及MG嵌段的双功能褐藻胶裂解酶(polyMG)。褐藻胶裂解酶来源广泛，已经从多种海洋动物、海洋和陆地微生物体内分离得到，海洋细菌是褐藻胶裂解酶的重要来源，如假单胞菌、黄杆菌、交替假单胞菌、弧菌、芽胞杆菌等。

目前报道的产酶细菌依然存在着酶活性较低、降解位点单一等缺陷，限制了褐藻胶裂解酶以及酶解法制备褐藻寡糖的发展。因此，筛选高效降解褐藻胶的新型菌种资源，是开发褐藻胶资源，探索高值化利用新途径的必然要求。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了产褐藻胶裂解酶菌株及其应用。该菌株 HB182678及其发酵制得的褐藻胶裂解酶能够用于降解褐藻。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了产褐藻胶裂解酶菌株Mangrovicoccus sp.，其保藏编号为GDMCCNo.61000。

基于上述研究，本发明还提供了所述产褐藻胶裂解酶菌株Mangrovicoccus sp.在制备褐藻胶裂解酶中的应用。

本发明还提供了所述产褐藻胶裂解酶菌株Mangrovicoccus sp.在降解褐藻中的应用。

本发明还提供了所述产褐藻胶裂解酶菌株Mangrovicoccus sp.发酵制得的褐藻胶裂解酶。

本发明还提供了所述褐藻胶裂解酶在降解褐藻中的应用。

此外，本发明还提供了制备褐藻胶裂解酶的方法，采用所述产褐藻胶裂解酶菌株Mangrovicoccus sp.，发酵制得褐藻胶裂解酶。

在本发明的一些具体实施方案中，包括以下步骤：

步骤1、菌株活化：将所述的产褐藻胶裂解酶菌株Mangrovicoccus sp.接种于固体培养基，于28～37℃培养24～48h，得活化的菌株；

步骤2、液体培养：将所述活化的菌株接种于液体种子培养基中，于 28～37℃、120～200r/min振荡培养12～24h，制成种子液；

步骤3、发酵培养：将所述种子液接种于液体发酵培养基中，于28～37℃、 150～200r/min振荡培养24～60h，收集发酵液，离心，收集上清液得褐藻胶裂解酶的粗酶液，纯化获得褐藻胶裂解酶。