[发明专利]用于鉴定瑞士乳杆菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌的分子标记、检测引物和检测方法

说明书

本发明公开了用于鉴定瑞士乳杆菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌的分子标记、检测引物和检测方法。所述的分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、2、3、4、5或6所示。本发明能有效鉴定瑞士乳杆菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌，具有快速、准确、经济和操作简单等优点，便于食品企业和检验机构使用。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及用于鉴定瑞士乳杆菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌的分子标记、检测引物和检测方法。

背景技术：

瑞士乳杆菌是乳酸菌中营养缺陷最高的菌种之一，具有强大的蛋白水解能力，其蛋白水解产物具有抗高血压、消炎和抗癌等功能，是一种安全的益生菌。该菌能适应多种环境，包括高温、低pH、低渗透压、低氧等，比其他益生菌如双歧杆菌和乳杆菌更适合制成益生菌制剂。瑞士乳杆菌可产生许多具有抑菌活性的多肽物质和有机酸，对致病菌具有较好的抑制作用，在食品保鲜、防腐和延长货架期等方面起着重要的作用。瑞士乳杆菌是瑞士干酪和意大利干酪生产中的传统用菌，对奶酪风味有重要影响。发酵乳杆菌多用于谷物类食品的发酵和豆豉的生产。此外，发酵乳杆菌是青贮饲料添加剂菌种，作为动物的饲料添加剂，具有提高猪营养物质消化率，改善胃肠道微生物菌系组成、肠道粘液蛋白表达以及肠道粘膜免疫功能。嗜酸乳杆菌是目前乳酸菌家族中具有较高研究价值的益生菌，被视为第三代酸乳发酵剂菌种，在乳品行业广泛应用。嗜酸乳杆菌与其他益生菌混合发酵可改善酸奶风味。此外，嗜酸乳杆菌在肠道内定殖，能激活机体巨噬活性，诱发特异性和非特异性免疫反应,提高抗感染的能力。

目前这些乳杆菌鉴定主要采用通过生理生化鉴定试验来完成，菌落特征观察、接触酶试验、硝酸盐还原试验、精氨酸双水解试验、明胶液化、VP试验、硫化氢试验及各种糖醇类发酵试验等，操作较烦杂，试验周期较长。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF)在乳酸菌鉴定中具有较好的效果，但是仪器昂贵，难以在基层实验室推广应用。16S rDNA序列同源性分析作为乳酸菌鉴定已被广泛应用，但是需要进对于同源性较高的乳杆菌近缘种无法准确区分，且需要进一步测序。Grazia和Yu等分别基于pepC、pepN和htrA以及hsp60、pheS和tuf基因PCR扩增测序，进行了瑞士乳杆菌和嗜酸乳杆菌鉴定和进化分析，这些方法有助于乳杆菌的区分，但是建立在有限的几个管家基因基础上。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种用于鉴定瑞士乳杆菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌新的特异性分子标记。

本发明的鉴定瑞士乳杆菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌新的特异性分子标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1、2、3、4、5或6所示。

本发明的第二个目的是提供一种鉴定瑞士乳杆菌、发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌的鉴定引物组，其是以下8对引物中的一对以上的引物组合：

HP490315-helv5-F：5'-TTGTAGTTCACCGGGTTCACAT-3'

HP490315-helv5-R：5'-GCAATTGCTGGTGTGGTGAAT-3'；

Hp-helv2-F：5'-TATGCTTGCCACAAAGGTTCC-3'

Hp-helv2-R：5'-TAGCGGGAGCTGTAGCGATG-3'；

Fermentum_00905-5-F：5'-ACGACGTTCTCGGTGTCAAA-3'

Fermentum_00905-5-R：5'-TCGCCTGGGAAATCGAGATG-3'；

Fermentum-4hy-6-F：5'-CGGTAACAACGGTTTCGTCG-3'

Fermentum-4hy-6-R：5'-CAGCCAGGGTTAAGACGGTT-3'；