[发明专利]一种利用全外显子测序检测单基因遗传病的方法

说明书

本发明公开了一种利用全外显子测序检测单基因遗传病的方法，包括如下步骤：S1、基因组DNA提取：采用试剂盒及标准DNA提取方法提取基因组DNA；S2、基因捕获：基因组DNA经DNA切割仪切割、末端修复、接头连接、PCR扩增、杂交捕获；S3、测序：高通量测序采用Illumina HiSeq平台进行全外显子测序；S4、数据分析：分析测序结果，包括测序深度、测序长度、测序总量；S5、筛选：使用数据库进行已知或疑似致病突变筛选；S6、检测结果解读：选用人类表型标准术语或人类在线孟德尔遗传数据库术语筛选致病基因。所述方法可以进行单基因遗传病诊断，快速明确病因，对于疾病的临床诊断和治疗具有重要意义。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，更具体地，涉及一种一种利用全外显子测序检测单基因遗传病的方法。

背景技术

外显子(expressed region)是真核生物基因的一部分，它在剪接(Splicing)后会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被表达为蛋白质。外显子是最后出现在成熟RNA中的基因序列，又称表达序列。既存在于最初的转录产物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。术语外显子也指编码相应RNA外显子的DNA中的区域。所有的外显子一同组成了遗传信息，该信息会体现在蛋白质上。在人类基因中大约有180000个外显子，占人类基因组的1％，约30MB，人类基因组的蛋白编码区域大约包含85％的致病突变。

单基因遗传病是指由于单个基因的突变而引起的遗传病，又称孟德尔遗传病。它的遗传方式遵循孟德尔定律，突变既可来自父母，也可源于自身，都有遗传给下一代的可能。单基因遗传病的单一发病率低，但种类繁多，目前己发现的有9000多种，因此总体发病率较高。根据世界卫生组织(WHO)统计，在全球出生人口中所有单基因遗传病的累计发病率高达10/1000。单基因遗传病危害严重，大多数致畸，致残甚至致死，缺乏有效治疗手段，临床诊断困难。全外显子组测序是利用序列捕获技术将全基因组外显子区域脱氧核糖核酸捕捉并富集后进行高通量测序的基因组分析技术，对于遗传病的检测具有巨大的意义。利用全外显子组测序技术将会是单基因遗传病基因检测的一种有效检测方式。

发明内容

本发明旨在克服上述现有技术的至少一种缺陷，提供一种利用全外显子测序检测单基因遗传病的方法，所述检测单基因遗传病的方法可以进行单基因遗传病诊断，快速明确病因，可以指导临床治疗及判断预后，有效降低病死率，所述方法还能节省临床时间，性价比高，对于疾病的临床诊断和治疗具有重要意义。

本发明采取的技术方案如下：

一种利用全外显子测序检测单基因遗传病的方法，包括如下步骤：

S1、基因组DNA提取：采用试剂盒及标准DNA提取方法提取基因组DNA；

S2、基因捕获：基因组DNA经DNA切割仪切割、末端修复、接头连接、PCR扩增、杂交捕获；

S3、测序：高通量测序采用Illumina HiSeq平台进行全外显子测序；

S4、数据分析：分析测序结果，包括测序深度、测序长度、测序总量；

S5、筛选：变异采用软件进行注释，使用数据库进行已知或疑似致病突变筛选，并对每个变异进行分类；

S6、检测结果解读：选用人类表型标准术语或人类在线孟德尔遗传数据库术语筛选致病基因。

优选地，所述步骤S1采用的试剂盒为QIAamp DNA Blood Mini Kit 50次提取试剂盒。

优选地，步骤S2中杂交捕获所采用的试剂为xGen Exome Research Panel v1。

优选地，步骤S2中基因组DNA经DNA切割仪切割得到的为180-200bp的片段。