[发明专利]一种基于实时荧光RT-PCR的新型冠状病毒核酸快速检测方法在审
| 申请号： | 202011032279.3 | 申请日： | 2020-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN112226535A | 公开（公告）日： | 2021-01-15 |
| 发明（设计）人： | 崔大祥;陈晓敏;徐艳;田静;李雪玲;梁辉 | 申请（专利权）人： | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 上海东亚专利商标代理有限公司 31208 | 代理人： | 董梅 |
| 地址： | 201109 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 实时 荧光 rt pcr 新型 冠状病毒 核酸 快速 检测 方法 | ||
1.一种基于实时荧光RT-PCR的新型冠状病毒核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）合成针对新型冠状病毒核酸的ORF1ab、E基因及N基因的三对引物和探针，探针分别修饰不同的荧光报告基团和淬灭基团；
（2）在同一PCR反应管中配制一步法的实时荧光RT-PCR反应体系，反应液成分包括1 xPCR缓冲液、步骤（1）中的三对引物/探针、逆转录酶、
（3）对步骤（2）配制的RT-PCR反应体系在实时荧光定量PCR仪上进行扩增检测，其反应条件是42℃逆转录反应5分钟，95℃变性10秒，40个循环95℃变性5秒，60℃反应30秒。
2.根据权利要求1所述的基于实时荧光RT-PCR的新型冠状病毒核酸检测方法，其特征在于，所述的引物/探针同时包括SARS-CoV-2的ORF1ab、E基因及N基因，并且三种探针5’端修饰的荧光报告基团分别为FAM、HEX、ROX及Cy5中的任意三种，3’端的淬灭基团为BHQ1或BHQ2。
3.根据权利要求1所述的基于实时荧光RT-PCR的新型冠状病毒核酸检测方法，其特征在于，所述的实时荧光RT-PCR反应体系同时包括1 x PCR缓冲液、三对引物/探针、逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RNA以及DEPC水，并且引物的终浓度为200~400 nM，探针的终浓度为200nM。
4.根据权利要求1所述的基于实时荧光RT-PCR的新型冠状病毒核酸检测方法，其特征在于，所述的实时荧光RT-PCR反应条件是42℃逆转录反应5分钟，95℃变性10秒，40个循环95℃变性5秒，60℃反应30秒，并且在40个循环中的60℃阶段同时检测三种荧光探针的荧光信号，根据获得的Ct值判断是否有病毒基因存在于样品中。
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