[发明专利]用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的引物对和探针及其方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的qPCR方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：提取杀菌型乳制品的DNA，以杀菌型乳制品的DNA为模板，进行qPCR扩增，获得PCR扩增产物；

步骤二：检测扩增产物的荧光信号；

其中，用于qPCR扩增的反应体系中含有扩增乳酸乳球菌的特异性引物对和乳酸乳球菌的特异性探针，所述扩增乳酸乳球菌的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQID NO：2所示；所述乳酸乳球菌的特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

2.如权利要求1所述的用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的qPCR方法，其特征在于，还包括：

步骤三：计算待测样品中乳酸乳球菌的含量。

3.如权利要求1所述的用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的qPCR方法，其特征在于，步骤一的杀菌型乳制品的DNA的提取方法，包括预处理步骤，所述预处理步骤为：将所述的杀菌型乳制品的DNA与无菌蒸馏水以体积比为1:9的比例混匀，取5-10mL的样品加入到离心管中，高速离心，去上清；沉淀中加入5mL无菌蒸馏水，在涡旋振荡器上将沉淀混匀，混匀液放在沸水中加热，直至蛋白质絮状物出现，高速离心，去上清；沉淀中加入5mL无菌蒸馏水溶解，涡旋振荡器上混匀，再次在沸水中加热10min，高速离心，去上清。

4.如权利要求3所述的用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的qPCR方法，其特征在于，预处理步骤中的高速离心方式为9000g离心5min。

5.如权利要求1所述的用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的qPCR方法，其特征在于，步骤一的qPCR扩增的反应体系和反应条件如下：

qPCR扩增的反应体系为20μL，包含10×PCR缓冲液10μL，10μmol/μL的上/下游引物各0.5μL，10μmol/μL的探针0.5μL，10μmol/L的dNTP 1μL，5U/μL的Taq DNA聚合酶0.5μL，补足H₂O，模板DNA 1μL；

qPCR扩增的反应程序为：50℃5min，94℃预变性5min，94℃变性10s，55℃退火延伸45s，进行40个循环，4℃保存反应产物。

6.一种用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括：

(a)扩增乳酸乳球菌的特异性引物对，所述扩增乳酸乳球菌的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；

(b)乳酸乳球菌的特异性探针，所述乳酸乳球菌的特异性探针的核苷酸序列如SEQ IDNO：3所示。

7.如权利要求6所述的用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒还包括：乳酸乳球菌标准参照物。

8.一种用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述检测试剂盒在定量检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌成分中的应用。

9.一种用于检测杀菌型乳制品中乳酸乳球菌的特异性引物对和特异性探针，其特征在于，所述特异性引物对的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，所述特异性探针的序列如SEQ ID NO：3所示。