[发明专利]基于CRISPR-Cas12b系统的空肠弯曲菌检测试剂盒和方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的基于CRISPR-Cas12b系统的空肠弯曲菌检测方法，所述方法具体包括：

（1）体外转录纯化sgRNA，所述sgRNA的核苷酸序列为如SEQ ID NO.4-6所示的序列；

（2）提取样品基因组DNA；

（3）加样：将样品基因组DNA、阳性对照或阴性对照分别加入装有CRISPR-Cas12b反应体系的PCR管中，获得对应的样品反应管、阳性反应管或阴性反应管，所述CRISPR-Cas12b反应体系中含有如SEQ ID NO.4-6所示的sgRNA序列和SEQ ID NO.7-8所示核苷酸序列；

（4）CRISPR-Cas12b反应：反应管置于PCR仪上，设置参数：48°C 30-35 min，65°C 5min；进行反应；

（5）CRISPR-Cas12b反应结束后，分析结果：将反应液放置 485 nm 的蓝光下，通过观察反应液的颜色变化来确定是否含有空肠弯曲菌，当含有空肠弯曲菌时，反应液会变成绿色；

所述方法利用CRISPR-Cas12b系统检测靶标位点，所述靶标位点的核苷酸序列如SEQID NO.1-3任一所示。

2.一种用于检测空肠弯曲菌的CRISPR-Cas12b的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：Cas12b蛋白、sgRNA以及报告基因，所述CRISPR-Cas12b检测空肠弯曲菌的靶标位点如SEQ ID NO.1-3任一所示，所述CRISPR-Cas12b检测试剂盒利用Cas12b和sgRNA进行CRISPR检测，所述sgRNA以所述靶标位点为靶序列进行设计，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ IDNO.4-6所示，所述报告基因为如SEQ ID NO.7-8所示核苷酸序列，每个所述报告基因的两端分别含有荧光基团和猝灭基团。

3.如权利要求2所述检测试剂盒在制备空肠弯曲菌检测产品中的用途。