[发明专利]一种氧化葡萄糖酸杆菌中基因敲除的方法有效
申请号: | 202010978779.X | 申请日: | 2020-09-17 |
公开(公告)号: | CN112111505B | 公开(公告)日: | 2022-03-15 |
发明(设计)人: | 周景文;秦志杰;杨宇彤;陈坚;曾伟主;堵国成 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12N15/74 | 分类号: | C12N15/74;C12N15/53;C12R1/01 |
代理公司: | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人: | 林娟 |
地址: | 214000 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 氧化 葡萄糖 杆菌 基因 方法 | ||
1.一种敲除氧化葡萄糖酸杆菌基因的工具,其特征在于,所述工具由Cas3蛋白、crRNA、表达crRNA的启动子和表达载体组成;所述Cas3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示;所述crRNA由任意能够在氧化葡萄糖酸杆菌中可以表达的启动子启动;所述Cas3蛋白由氧化葡萄糖酸杆菌自身的启动子启动;crRNA由目的基因的spacer序列和其两端的重复序列组成;所述表达crRNA的启动子为启动子pAtse,所述启动子pAtse的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;以p2-1载体为表达载体,p2-1载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的工具,其特征在于,所述氧化葡萄糖酸杆菌为氧化葡萄糖酸杆菌WSH-003。
3.一种敲除氧化葡萄糖酸杆菌中目的基因的方法,其特征在于,将权利要求1~2任一所述工具转入氧化葡萄糖酸杆菌细胞中得到重组菌,再将重组菌培养,实现对氧化葡萄糖酸杆菌中目的基因的敲除或缺失。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述氧化葡萄糖酸杆菌为氧化葡萄糖酸杆菌WSH-003。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,将目的基因的上下游同源臂融合的片段与所述工具共同转入氧化葡萄糖酸杆菌中。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述目的基因包括山梨糖还原酶的编码基因。
7.权利要求1或2所述工具,或权利要求3~6任一所述方法在氧化葡萄糖酸杆菌基因敲除中的应用。
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