[发明专利]一种石斑鱼精巢人工催熟的方法

说明书

本发明公开了一种石斑鱼精巢人工催熟的方法，其包括以下步骤：构建Dmrt1基因真核表达载体；采用脂质体包埋构建好的Dmrt1真核表达载体；在繁殖季节选择不能产生精液的雄性石斑鱼；在石斑鱼腹部开微孔，采用微量注射器将脂质体包埋的Dmrt1真核表达载体直接注射入精巢；注射完放入水泥池饲养，按时投喂高蛋白饵料。本发明构建了Dmrt1真核表达载体，转化到大肠杆菌中培养，可获得大量带dmrt1基因的重组表达载体；再通过脂质体包埋载体后注射到石斑鱼精巢中，直接促进精巢的成熟，具有准确性高，催熟效率高，适用范围广的优点。

技术领域

本发明涉及石斑鱼养殖技术领域，具体涉及一种石斑鱼精巢人工催熟的方法。

背景技术

石斑鱼隶属于硬骨鱼纲(Osteichthyes)、辐鳍亚纲(Neopterygii)、棘鳍总目(Acanthopterygii)、鲈形目(Perciformes)、鲈亚目(Percoidei)、鮨科(Serranidae)。由于石斑鱼具有富含营养、肉质鲜美、低脂肪、高蛋白等特点，是人们喜爱的海水鱼珍品。石斑鱼的价格昂贵，具有很高的经济价值，近年来由于近岸滥捕，产量锐减，市场供不应求。在我国南方沿海广东、海南、福建、广西等地石斑鱼已成为海水养殖的主要对象，经济价值巨大。

石斑鱼为典型的雌雄同体雌性先熟鱼类，低龄鱼卵巢先成熟，表现为雌性。随着年龄的增长，卵巢萎缩吸收，性逆转为雄鱼。因此，在人工繁育中往往存在雄鱼缺乏或雌雄亲鱼成熟不同步的现象，此外，很多雄性亲鱼在繁殖季节精巢很难发育成熟产生精子，并且近年来雄鱼产出的精子数量和质量下降明显，由于这个原因导致石斑鱼雄性亲鱼培育难度加大，这严重制约了石斑鱼人工繁育工作的开展。

目前，针对雄性石斑鱼的催熟方法基本没有，主要通过加强营养来促进其精巢的成熟，但是此方法往往效果不佳。通过加强营养来提高其精巢成熟往往操作时间长，而且培养的准确性低，大部分加强营养后还是不能产出高质量精子，同时饲喂方法，生长环境对其影响比较大。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术中通过加强营养来提高雄性石斑鱼的精巢成熟所存在的操作时间长、培养的准确性低的问题，提供一种石斑鱼精巢人工催熟方法，该方法具有准确性高、快速的优点。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种石斑鱼精巢人工催熟的方法，其特征在于，包括以下步骤：

构建Dmrt1基因真核表达载体：通过克隆获得斜带石斑鱼Dmrt1开放读码框，通过双酶切和连接将基因构入真核表达载体，转化到大肠杆菌中扩大培养，提取获得大量带dmrt1基因的真核表达载体；

脂质体包埋真核表达载体：采用脂质体包埋构建好的Dmrt1真核表达载体；

选择石斑鱼：在繁殖季节选择不能产生精液的雄性石斑鱼；

注射脂质体包埋的Dmrt1真核表达载体：在石斑鱼腹部开微孔，采用微量注射器将脂质体包埋的Dmrt1真核表达载体直接注射入精巢；

注射完成后的饲养：注射完放入水泥池饲养，按时投喂高蛋白饵料。

Dmrt1(Doublesex and mab-3related transcription factor 1)是雄性性别分化和性别决定的关键基因，对脊椎动物精巢发育至关重要。在哺乳类、鸟类、爬行类、鱼类和两栖类等动物中陆续发现了该基因。在小鼠的胚胎中，Dmrt1在雌雄生殖期的早期都有表达，随后睾丸中表达量增加，而卵巢中表达量减弱。通过RT-PCR可以在鳄鱼胚胎泌尿系统的早期检测Dmrt1的表达。随着性腺的发育，雄性的表达量明显较雌性的高。在鱼类，Dmrt1主要在精巢的支持细胞(Sertoli cells)表达，对精巢的分化、雄性性状的维持和精巢的成熟起关键作用。