[发明专利]一种提高丝状真菌有机酸合成能力的方法

权利要求书

1.一种提高丝状真菌重组菌的有机酸合成能力的方法，其特征在于，通过基因工程的方法在产二元有机酸的丝状真菌中导入有机酸合成正调控基因中的5-磷酸核糖激酶以及1,5-双磷酸核糖羧化/加氧酶；所述的二元有机酸选自苹果酸和/或琥珀酸；

所述丝状真菌选自嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)苹果酸发酵菌株JG207。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，同时还下调有机酸合成负调控基因，所述有机酸合成负调控基因选自乳酸脱氢酶、丙酮酸脱羧酶、或丙酮酸羧激酶的一种或多种。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，同时还导入外源性有机酸合成正调控基因糖转运蛋白。

4.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述重组菌株与其出发菌株相比，有机酸生产能力增强或提高了至少10％。

5.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述5-磷酸核糖激酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示、所述1,5-双磷酸核糖羧化/加氧酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示、糖转运蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.56所示；所述的乳酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQID NO.15所示、丙酮酸脱羧酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示、丙酮酸羧激酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。

6.如权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述导入有机酸合成正调控基因的方法是通过导入含有所述正调控基因的表达载体实现。

7.如权利要求2至3任一项所述的方法，其特征在于，所述下调有机酸合成负调控基因是通过基因敲除或基因编辑或抑制剂来实现，所述抑制剂选自所述抗体、抑制性mRNA、反义RNA、microRNA、miRNA、siRNA、shRNA或者活性抑制剂。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述下调有机酸合成负调控基因表达水平是指通过基于CRISPR/Cas9的基因组编辑方法实现。

9.根据权利要求1至8任一项所述的方法制备得到的重组菌。

10.利用权利要求9所述的重组菌生产有机酸的方法，其特征在于，利用所述的重组菌以单糖、聚糖和/或植物生物质为底物发酵生产有机酸。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的单糖，选自葡萄糖、木糖、阿拉伯糖，或其组合；所述的聚糖，选自晶纤维素、半纤维素，或其组合；所述的植物生物质，选自农作物秸秆、林业废弃物、能源植物或其部分或全部分解产物；其中，所述农作物秸秆选自玉米秸秆，小麦秸秆，水稻秸秆，高粱秸秆，大豆秸秆，棉花秸秆，甘蔗渣，玉米芯；所述林业废弃物选自枝叶，锯末；所述能源植物选自甜高粱，柳枝稷，芒草，芦苇或其组合。