[发明专利]一种DNA和RNA共建库的方法及试剂盒在审
| 申请号： | 202010965886.9 | 申请日： | 2020-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN112176420A | 公开（公告）日： | 2021-01-05 |
| 发明（设计）人： | 冯延叶;李艳玲;高伟;赖煦卉;孙大鹏 | 申请（专利权）人： | 上海英基生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 湖北天领艾匹律师事务所 42252 | 代理人： | 杨建军 |
| 地址： | 201100 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 dna rna 共建 方法 试剂盒 | ||
1.一种DNA和RNA共建库的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.对RNA和DNA混合样本进行RNA片段化及DNA变性；
S2.基于S1的产物，利用随机引物进行DNA的链置换反应，将DNA片段带上5'接头，形成5'Truncted Adapter-DNA；将RNA逆转录成一链cDNA，带上5'接头，形成5'TrunctedAdapter-cDNA；
S3.使用外切酶对多余的引物进行消化，再利用磁珠对产物进行纯化；
S4.对带5'接头的DNA及带有5'接头的一链cDNA的3'末端添加一段多聚寡核苷酸PloyC，得到5'Truncted adapter-DNA-多聚寡核苷酸结构，利用DNA修复酶、DNA聚合酶及DNA连接酶将所述5'Truncted Adapter-DNA-多聚寡核苷酸的3'末端和P7接头连接；
S5.通过PCR文库扩增，得到上机测序文库。
2.根据权利要求1所述的DNA和RNA共建库的方法，其特征在于，所述步骤S1包括对混合样本中的DNA进行片段化。
3.根据权利要求1所述的DNA和RNA共建库的方法，其特征在于，所述随机引物为T5Truncted Adapter+N6，所述随机引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
4.根据权利要求1所述的DNA和RNA共建库的方法，其特征在于，所述步骤S2在Klenow(exo-)聚合酶和逆转录酶及RNA Inhibitor条件下进行一链cDNA的合成及链置换反应。
5.根据权利要求1所述DNA和RNA共建库的方法，其特征在于，所述步骤S3使用Exo I外切酶对残留引物进行消化。
6.根据权利要求1所述的DNA和RNA共建库的方法，其特征在于，所述P7接头为T7Truncated Adapter。
7.根据权利要求1所述的DNA和RNA共建库的方法，其特征在于，所述逆转录酶为Hiscript II逆转录酶、Hiscript III逆转录酶、Hiscript IV逆转录酶中的一种；所述DNA聚合酶选自Klenow(exo-)聚合酶、Bsu DNA聚合酶、phi29聚合酶、Taq聚合酶、A家族DNA聚合酶、B家族高保真聚合酶中的一种。
8.一种DNA和RNA共建库的试剂盒，其特征在于，包括如下组分：
1)工具酶：所述工具酶包括逆转录酶、末端转移酶、DNA修复酶、DNA聚合酶、DNA连接酶；
2)工具酶反应体系：各个工具酶对应的反应所需要的缓冲液；
3)接头体系：随机引物及T7 Truncated Adapter；
4)外切酶消化体系；
5)PCR反应体系；
6)Low-EDTA-TE。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述随机引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
10.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：
所述逆转录酶为Hiscript II逆转录酶、Hiscript III逆转录酶、Hiscript IV逆转录酶中的一种；
所述DNA连接酶为T4 DNA连接酶、Taq DNA连接酶及E.coli DNA连接酶中的一种；
所述聚合酶为Klenow(exo-)聚合酶、Bsu DNA聚合酶、phi29聚合酶、Taq聚合酶、A家族DNA聚合酶、B家族高保真聚合酶中的一种。
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