[发明专利]一种肠道嗜酸乳杆菌的检测方法和试剂

说明书

本申请公开了一种肠道嗜酸乳杆菌的检测方法和试剂。本申请的肠道嗜酸乳杆菌的检测方法，包括获取待测对象的粪便样品，提取粪便样品的核酸样本，采用嗜酸乳杆菌特异性的PCR扩增检测核酸样本，通过检测粪便样品中的嗜酸乳杆菌表征肠道嗜酸乳杆菌。本申请的肠道嗜酸乳杆菌检测方法，采用粪便样品的核酸样本的嗜酸乳杆菌特异性PCR扩增检测结果表征肠道嗜酸乳杆菌，为基于肠道嗜酸乳杆菌的肠道菌群结构分析、临床检验指导和用药、肠道菌群动态平衡研究、预防疾病等提供了一种新的方案和途径。

技术领域

本申请涉及肠道微生物检测领域，特别是涉及一种肠道嗜酸乳杆菌的检测方法和试剂。

背景技术

嗜酸乳杆菌(Lactobacillus.Acidophilus)属于乳杆菌属，是革兰氏阳性杆菌，其杆的末端呈圆形。嗜酸乳杆菌主要存在于胃和小肠中，其在小肠释放乳酸、乙酸和对有害菌起抑菌作用的抗菌素。嗜酸乳杆菌可以调节胃和肠道微生态的平衡，抑制肠道不良微生物的增殖，对致病微生物具有拮抗作用。

人体肠道内益生菌的比例越高，微生态环境就越好，肠道就越显年轻有活力。肠道的健康不仅体现在消化吸收良好、大便正常和不易感染肠道疾病；对全身而言，充足的、有活力的益生菌通过抑制各种有害菌，减少体内毒素的生成，减轻肝脏解毒负担。双歧杆菌和嗜酸乳杆菌在肠道内发酵后，可产生乳酸和醋酸，能提高钙、磷、铁的利用率，促进铁和维生素D的吸收；还可以产生维生素K及维生素B，可以减少胆固醇的吸收，并能降低辐射对人体的伤害。卫生部规定，嗜酸乳杆菌可用于保健食品的益生菌菌种。另外，研究显示，嗜酸乳杆菌与糖尿病有一定的相关性，能增加T2DM病人葡萄糖耐受性与总抗氧化能力，嗜酸乳杆菌在病原体抑制、肠道免疫调节中起重要作用。

因此，人体肠道内嗜酸乳杆菌的检测对肠道菌群结构分析、临床检验指导和用药、保持肠道菌群动态平衡、维持健康、预防疾病等都具有重要意义。目前，研究比较多的是对培养的嗜酸乳杆菌的活性检测或分子检测，尚未有能够有效检测人体肠道内嗜酸乳杆菌的方法。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的肠道嗜酸乳杆菌的检测方法和试剂。

本申请采用了以下技术方案：

本申请的第一方面公开了一种非诊断治疗目的的肠道嗜酸乳杆菌的检测方法，包括获取待测对象的粪便样品，提取粪便样品的核酸样本，采用嗜酸乳杆菌特异性的PCR扩增检测核酸样本，通过检测粪便样品中的嗜酸乳杆菌表征肠道嗜酸乳杆菌。

需要说明的是，本申请研究显示，在正常情况下，粪便样品中的嗜酸乳杆菌含量与肠道嗜酸乳杆菌呈正相关；因此，可以通过检测粪便样品的核酸样本中的嗜酸乳杆菌，以此表征肠道嗜酸乳杆菌。本申请的检测方法，为基于肠道嗜酸乳杆菌的肠道菌群结构分析、临床检验指导和用药、肠道菌群动态平衡研究、预防疾病等提供了一种新的方案。

本申请的一种实现方式中，嗜酸乳杆菌特异性的PCR扩增，具体采用的是染料法实时荧光定量PCR扩增，扩增引物的上游引物为Seq ID No.1所示序列，下游引物为Seq IDNo.2所示序列；

Seq ID No.1：5’-ACTGCTGCTGGTGTTCGTGGTA-3’

Seq ID No.2：5’-TGACGCAGGTGTCCTCTTACCA-3’。

需要说明的是，本申请的关键在于通过检测粪便中的嗜酸乳杆菌表征肠道嗜酸乳杆菌，从检测原理上来说，本申请是采用嗜酸乳杆菌的特异性检测引物通过PCR扩增进行检测，现有技术中也有关于嗜酸乳杆菌PCR检测的相关研究，但是，现有的嗜酸乳杆菌PCR检测方案不能有效的对粪便核酸样本中的嗜酸乳杆菌进行检测。因此，本申请特别研发了新的能够特异性的针对粪便核酸样本进行嗜酸乳杆菌检测的扩增引物。