[发明专利]靶向HLA-I类分子的通用型CAR-T细胞及其应用

权利要求书

1.一种用于制备通用型CAR-T细胞的试剂，所述试剂包括：

(i)靶向I类人类白细胞抗原（Human LeukocyTe AnTigen-I,HLA-I）的sgRNA或用于表达所述sgRNA的表达载体，所述sgRNA为选自下组的一种或多种sgRNA：

(A1) 靶向α链的HLA-A转座子的sgRNA：HLA1-sgRNA9或HLA1-sgRNA2；

(A2) 靶向α链的HLA-B转座子的sgRNA：HLA1-sgRNA258或HLA1-sgRNA252，所述HLA1-sgRNA9为含有识别区序列为选自如SEQ ID NO.: 9所示的核苷酸序列的sgRNA，所述HLA1-sgRNA2为含有识别区序列为选自如SEQ ID NO.: 2所示的核苷酸序列的sgRNA，HLA1-sgRNA258为含有识别区序列为选自如SEQ ID NO.: 258所示的核苷酸序列的sgRNA，HLA1-sgRNA252为含有识别区序列为选自如SEQ ID NO.: 252所示的核苷酸序列的sgRNA；以及

(ii)表达Cas9蛋白或表达Cas9蛋白的表达盒。

2.如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的靶向HLA1的α链的sgRNA还包括与所述识别区序列相连且位于3’端的附加序列。

3.如权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述附加序列如SEQ ID No.: 1448所示。

4.一种用于制备通用型CAR-T细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有：

(i) 第一容器以及位于所述第一容器内的第一表达载体，所述第一表达载体含有第一表达盒，所述第一表达盒用于表达所述靶向HLA-I的α链的sgRNA；

以及任选的

(ii) 第二容器以及位于所述第二容器内的第二表达载体，所述第二表达载体含有第二表达盒，所述第二表达盒用于表达Cas9蛋白的表达盒；

其中，所述靶向α链的sgRNA,为靶向HLA-A或HLA-B转座子的sgRNA，所述sgRNA核苷酸序列选自下组的一种或多种核苷酸序列：SEQ ID NO.: 2、9、252和258所示的核苷酸序列。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述第一表达盒还用于表达靶向HLA-I的B2M的sgRNA。

6.一种制备通用型CAR-T细胞的方法，所述方法包括：

(1)提供一待改造的CAR-T细胞；

(2)利用如权利要求1所述的试剂改造所述CAR-T细胞，得到通用型CAR-T细胞；

以及任选的

(3)验证得到的CAR-T细胞为通用型CAR-T细胞。

7.一种通用型CAR-T细胞，所述CAR-T细胞为利用如权利要求1所述的试剂、如权利要求4所述的试剂盒、或如权利要求6所述的方法制备的CAR-T细胞。

8.一种细胞制剂，所述细胞制剂含有如权利要求7所述的通用型CAR-T细胞。

9.一种如权利要求1所述的试剂在制备药物中的用途，所述试剂用于(a)敲除HLA-I的α链基因；和/或(b)制备通用型CAR-T细胞。