[发明专利]产己酸乙酯的葡萄牙棒孢酵母菌株及其培养方法与应用

说明书

本发明涉及生物合成己酸乙酯的葡萄牙棒孢酵母菌株及其培养方法与应用，该菌株命名为Clavispora lusitaniae YX3308，已于2020年4月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体地说涉及新分离的产己酸乙酯的酵母菌株及其培养方法与应用。

技术背景

白酒是中国的国酒，中国白酒独特的发酵工艺以及开放的酿造环境，使得中国白酒风味成分的多样性和独特性高于其他五大蒸馏酒。白酒中的香气成分十分复杂，主要分为酯类、酸类、高级醇、醛类等，白酒中酯类和高级醇是评价白酒质量的重要指标。酯类是白酒风味化合物中种类最多的一类化合物，在白酒中已经发现的酯类超过400余种，含量占微量成分总量的75-95％，是白酒中含量较多的有机化合物。酯类物质能够散发出浓郁的果香，可以增强且丰富酒香的效果，在不同香型的白酒中，酯类物质是决定其特色的重要因素之一。己酸乙酯是浓香型白酒的主体香型，在感官上具有水果香的挥发性酯类，在浓香型白酒风味起着重要的作用。在国标中显示，一级浓香型白酒中己酸乙酯含量为0.6-2.5g/L，优级浓香型白酒中己酸乙酯含量为1.2-2.8g/L。以上均体现了己酸乙酯在白酒中的地位。

白酒中的己酸乙酯主要是体系中的己酸和乙醇经过酯化生成，在发酵过程中产生，大曲作为白酒发酵动力，为发酵提供了丰富的菌源，酵母菌是一类具有产己酸乙酯能力的微生物属，是传统发酵食品中酯类物质主要产生菌株。根据国内外研究，在酵母菌株中研究较少，且产量低。在采用生物技术产己酸乙酯的过程中，需要解决的关键问题是如何从源头上提高己酸乙酯的能力，也就是说，寻找高产己酸乙酯的酵母菌株是解决这一问题的关键。

随着白酒现代化分析研究发现，己酸乙酯是我国浓香型白酒中的特色风味物质，对于白酒的风味具有重要的影响。获得能高产己酸乙酯的酵母菌株，并将其强化应用到白酒酿造体系中，对于提高白酒己酸乙酯含量，提升白酒品质具有重要意义。

发明内容

针对酵母产己酸乙酯种类少、产量低等问题，以及提高传统酿造食品白酒中己酸乙酯含量，提升白酒品质的实际应用，本发明目的在于提供从白酒酒曲中新分离的高产己酸乙酯的菌株，命名为YX3308，并提供使用YX3308产己酸乙酯的培养方法与应用。

本发明涉及的酵母是通过梯度稀释法结合平板涂布法从酿酒酒曲中筛选获得，为葡萄牙棒孢酵母(Clavispora lusitaniae)，该菌株已于申请日前保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC 19730。

在一些实施方案中，上述所述菌株YX3308具有以下菌落特征和生化特征：

该菌株在固体培养基WL培养基上菌落呈乳白色，边缘规则，中间微微突起，湿润易挑起，细胞为椭圆形、芽殖；

该酵母菌株对葡萄糖的最高耐受为80％(w/v)、对氯化钠的最高耐受为15％；

该酵母菌株能够耐受0.06％己酸；能够耐受6％乙醇；能够耐受1200mg/L己酸乙酯，表明该菌株具有高产己酸乙酯的潜力；

该酵母菌株具有广泛的pH和温度适应性；

该酵母菌株在葡萄糖产酸、淀粉水解实验、脂肪酶水解实验、重氮蓝B实验、新生隐球菌实验、TTC实验、耐受1％乙酸实验、尿素水解实验均呈现阴性；

该酵母菌株在L-DOPA黑色素实验和熊果苷分解实验呈阳性；

该酵母菌株可耐受25ug/mL的放线菌铜。

葡萄牙棒孢酵母YX3308可以用于发酵过程中产己酸乙酯，在优化的培养条件下产量可达62.04mg/L。可以作为提高白酒中己酸乙酯含量的功能微生物菌株应用到白酒的生产中。