[发明专利]一种利用白酒糟生产胶冻样芽孢杆菌的技术方法

说明书

本发明公开了一种利用白酒糟生产胶冻样芽孢杆菌的技术方法，所述方法包括：(1)菌种活化：将放置在4℃冰箱内保藏的胶冻样芽孢杆菌转接至固体基础培养基中，恒温培养；(2)液体培养：冲洗固体平板，将活化后菌种转接至液体种子培养基中，按照液体基础培养条件进行培养。本发明所述方法能显著提高胶冻样芽孢杆菌的菌体数和芽孢率。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种利用白酒糟生产胶冻样芽孢杆菌的技术方法。

背景技术

胶冻样芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)是一种能分解硅酸盐矿物的细菌，国内一些学者也把它称为硅酸盐细菌。长期以来对于这个种的特性一直有不同的意见，因此其分类地位、名称直到1998年才得到国际上承认。其能分解长石、云母等铝硅酸盐类原生态矿物，使土壤中难溶性K、P、Si等转变为可溶性的，供植物生长利用。同时还可以产生多种生物活性物质促进植物生长。大量田间试验表明，以胶冻样芽孢杆菌为主要成分的生物钾肥在缺钾土壤上对各种农作物表现出较好的增产效果。我国钾肥资源严重不足，国家每年需大量外汇进口无机钾肥。因此，开发利用生物钾肥不仅可以保护生态环境，也能带来较好的经济效益。近年来也有研究表明，该菌产生的荚膜多糖是很好的生物絮凝聚剂，0.1ml/L的多糖对高岭土可起到99.6％的絮凝效果。但目前对于胶冻样芽孢杆菌的研究主要集中在解钾强度及实际应用效果方面，而对于发酵条件的研究并不多。

微生物菌剂，绝大部分产品都是以活菌发挥作用的，有效的活菌数是衡量微生物菌剂品质的重要指标。产品中必须含有相当数量的活菌数才能达到相应的效果。我国对各种正式批准生产的菌剂都有明确的有效活菌数量和用量的规定。但是微生物菌剂随着保存时间的延长，活菌数量不断减少，在一定时期内，其有效活菌数降低，影响微生物制剂的使用效果。芽孢杆菌因其独特的营养体-芽孢-营养体的生活周期史，及其具有抵抗热、干燥、辐射、酸、碱等不良环境的生理特性，能延长微生物菌剂的保存期。因此，研究提高胶冻样芽孢杆菌芽孢率的发酵方法，对延长微生物菌剂的保藏期，具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的提供一种进一步降低成本、提高发酵单位、解决现有技术中发酵方法芽孢率低的问题的发酵方法。

本发明提供一种利用白酒糟生产胶冻样芽孢杆菌的技术方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化：将放置在4℃冰箱内保藏的胶冻样芽孢杆菌转接至含有白酒糟的固体基础培养基中，恒温培养；所述白酒糟为经过干燥处理过的白酒糟；

(2)液体培养：冲洗固体平板，将活化后菌种转接至液体种子培养基中，按照液体基础培养条件进行培养。

作为本发明的进一步改进，步骤(1)中固体培养基的成分，按质量份数计，包括营养琼脂30-50份，无水氯化钙0.05-0.15份，七水硫酸镁0.1-0.5份，四水氯化锰0.2-0.7份，氯化钠0.5-1.5份，硫酸锰0.05-0.15份、白酒糟100-150份。

作为本发明的进一步改进，步骤(1)中接种量为4％。

作为本发明的进一步改进，固体培养基的初始pH为6，培养温度为40-60℃，培养20-30min。

作为本发明的进一步改进，步骤(2)中液体种子培养基的成分，按质量份数计，包括营养肉汤150-200份，蜜糖50-80份，无水氯化钙0.6-0.8份，七水硫酸镁1-4份，硫酸锰2-5份，磷酸二氢钾0.15-0.4份，蒸馏水100-150份。

作为本发明的进一步改进，液体基础培养条件为：转速100-150r/min，温度为50-70℃，初始pH为5.5。

作为本发明的进一步改进，步骤(2)中接种量为2％，装液量为100mL/250mL，培养3-5d。

本发明公开了以下技术效果：