[发明专利]一种定量DNA甲基化程度的电化学方法及系统

权利要求书

1.一种DNA甲基化的电化学检测方法，包括：

S1)获取待测DNA样本；

S2)将待测DNA样本溶解于水性缓冲液中，得到DNA溶液；所述水性缓冲液为pH＝8.0的TE缓冲液；

S3)将电化学工作站的工作电极、参比电极和对电极浸没于电解液中，确定吸附前的DPV电流峰值作为基线电流A0，所述电解液为添加有水溶性铁氰化盐和水溶性亚铁氰化盐的缓冲液；所述缓冲液为PBS缓冲液；

S4)将工作电极浸入所述DNA溶液中并充分吸附，测试吸附后的DPV电流峰值，记为样本电流A1；

S5)根据基线电流A0和样本电流A1，计算DNA甲基化程度；

其中，检测过程中维持恒温至15～25℃，所述工作电极为金电极；

所述金电极在使用前经过铝粉进行打磨；

电化学工作站DPV模式的检测参数为：t equilibration＝0s、E begin＝-0.1V、E end＝0.5V、E step＝0.005V、E pulse＝0.05V、t pulse＝0.05s、Scan rate＝0.05V/s、Current range＝1uA–1mA；

DNA电流吸附率的计算公式为：

当计算得到的DNA电流吸附率低于10％时，对样本进行复核。

2.根据权利要求1所述的电 化学检测方法，其特征在于：检测过程中的温度维持在20℃。

3.根据权利要求1所述的电 化学检测方法，其特征在于：水溶性铁氰化盐选自[K₃Fe(CN)₆]、[Na₃Fe(CN)₆]；水溶性亚铁氰化盐选自[K₄Fe(CN)₆]或[Na₄Fe(CN)₆]。

4.根据权利要求1～3任一项所述的电 化学检测方法，其特征在于：水溶性铁氰化盐和水溶性亚铁氰化盐的摩尔比为(0.95～1.05)：1。

5.根据权利要求4所述的电 化学检测方法，其特征在于：水溶性铁氰化盐和水溶性亚铁氰化盐的摩尔比为1：1。

6.根据权利要求1～3任一项所述的电 化学检测方法，其特征在于：使用磁珠吸附法提取获得待测DNA样本。

7.根据权利要求1～3任一项所述的电 化学检测方法，其特征在于：所述待测DNA样本包括血浆cfDNA样本、组织DNA样本。

8.一种肿瘤筛查系统，包括：

样本DNA甲基化程度检测装置：采用 权利要求1～7任一项所述的方法，确定样本DNA甲基化程度；

结果判断装置：基于样本DNA甲基化程度，筛查恶性肿瘤。

9.根据权利要求8所述的肿瘤筛查系统，其特征在于：所述肿瘤选自肺癌、前列腺癌、乳腺癌、头颈部鳞癌、食管癌、淋巴瘤、胃癌、白血病、胰腺癌、肝癌、肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胆囊癌、宫颈癌。