[发明专利]一种眼底血管性疾病检测生物标记物、检测试剂盒及应用

说明书

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种眼底血管性疾病检测生物标记物、检测试剂盒及应用。该试剂盒主要包括RNA提取体系、反转录体系和PCR反应体系。本发明试剂盒采用荧光定量PCR技术，对2个环状RNA，即hsa_circ_0000615和hsa_circ_0000284进行表达水平及表达差异情况的检测，为眼底血管性疾病提供了新的检测标记物和预后评估方法，本发明提供的试剂盒具有创伤性小和操作简单等特点。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种眼底血管性疾病检测生物标记物、检测试剂盒及应用。

背景技术

眼底血管性疾病是一类以眼底血管病变为特征的疾病，发病率逐年增高，已经成为全球公共卫生问题和社会经济负担。眼底血管性疾病包括增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)、湿性年龄相关性黄斑变性(AMD)、早产儿视网膜病变(ROP)等。此类疾病已经成为从婴幼儿到老年人各个年龄阶段致盲和视力障碍的最主要原因，严重影响了患者的生活质量。该类疾病的重要病理特征为：视网膜无灌注、血管通透性增加和视网膜新生血管形成，其病程多累及黄斑、视盘，造成视力的严重损害甚至失明。目前，局部药物干预手段包括糖皮质激素治疗和玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子；手术治疗包括玻璃体切割、激光光凝和光动力学疗法。目前现有的治疗方法具有一定的局限性和较多的副作用。因此，寻找眼底血管性疾病的生物标志物，有助于探索底血管性疾病的发病机制、辅助诊断和判断疾病的进程，评估治疗效果。

环状RNA(circRNA)在真核细胞质中大量存在，是一类不具有5’末端帽子和3’末端poly尾巴以共价键形成环形结构的非编码RNA。与传统线性RNA相比，具有表达稳定性和序列高保守性等特征。circRNA参与生物体内多种生理过程的调控，包括细胞增殖、细胞分化、细胞周期和基因组印记等。circRNAs表达异常与许多疾病的发生发展(如肿瘤、心血管疾病和神经疾病等)密切相关。鉴于circRNA的特征及其疾病相关性，其有望成为诊断标志物和潜在药物靶点。

房水属于眼内部物，由睫状体产生，经过瞳孔、小梁网等最终进入血液，且处于动态循环之中，其构成成分与眼部的局部生理及其病理环境密切相关。房水中含有大量的外泌体，外泌体作为机体内至关重要的细胞间相互交流的中介物质，包含circRNA、蛋白质、mRNA及其脂质等。房水中的circRNAs等分子可以通过外泌体形式进行细胞间的信息交流。针对房水中circRNA的表达检测，可以反映疾病的状态。迄今为止关于circRNA作为眼底血管性疾病诊断标志物的研究较少。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种眼底血管性疾病检测生物标记物、检测试剂盒及应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明是这样实现的，一种眼底血管性疾病检测生物标记物，所述标记物为hsa_circ_0000615和/或hsa_circ_0000284，所述hsa_circ_0000615的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述hsa_circ_0000284的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步地，所述标记物为房水中的circRNA。

进一步地，所述hsa_circ_0000615的检测引物如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；所述hsa_circ_0000284的检测引物如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

一种眼底血管性疾病检测实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括PCR扩增体系，所述PCR扩增体系包括SYBR Premix Ex Taq 2×(包括Ex Taq酶，dNTP Mixture，Mg2+，TliRNaseH，TB Green)100μL，hsa_circ_0000615或hsa_circ_0000284特异性的qRT-PCR上游引物，hsa_circ_0000615或hsa_circ_0000284特异性的qRT-PCR下游引物，GAPDH定量PCR上游引物，GAPDH定量PCR下游引物；，引物各1管，10μM，100μL/管。