[发明专利]一种利用双酶复合转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法

权利要求书

1.一种利用双酶复合转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将木糖苷酶Xyl-G9和葡萄糖苷酶Bgcm混合得到复合酶；

(2)将黄芪甲苷和复合酶混合后调节pH，得到反应体系，进行转化反应，生成环黄芪醇；

所述木糖苷酶Xyl-G9和葡萄糖苷酶Bgcm的质量比为1.5～2.5:0.5～1.5；

所述木糖苷酶Xyl-G9的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述木糖苷酶Xyl-G9的制备方法为：

(1)将重组毕赤酵母GS115-Xyl-G9进行培养，得到培养的重组毕赤酵母GS115-Xyl-G9；

(2)诱导培养的重组毕赤酵母GS115-Xyl-G9进行产酶发酵；

(3)离心取上清得到木糖苷酶Xyl-G9；

所述葡萄糖苷酶Bgcm的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述葡萄糖苷酶Bgcm的制备方法为：

(1)将重组大肠杆菌BL21-Bgcm进行培养，得到培养的重组大肠杆菌BL21-Bgcm；

(2)诱导培养的重组大肠杆菌BL21-Bgcm进行产酶发酵；

(3)离心取上清得到葡萄糖苷酶Bgcm；

所述反应体系的pH值为5.5～7.5；

所述转化反应的温度为40～55℃，时间为12～48h；

所述反应体系中黄芪甲苷的质量浓度为10～120g/L；

所述反应体系中复合酶的浓度为0.3～4.8g/L；

所述利用双酶复合转化黄芪甲苷制备环黄芪醇的方法，还包括环黄芪醇的分离纯化步骤；

所述分离纯化包括如下步骤：先使用大孔吸附树脂初步分离纯化，再用制备色谱进行环黄芪醇的精制；

所述大孔吸附树脂分离纯化的条件为1倍柱体积上样，10vt％的乙醇水溶液以2倍柱体积洗脱杂质，70vt％乙醇水溶液以3倍柱体积洗脱产品；

所述大孔吸附树脂的型号为Sp700。

所述色谱法纯化的条件为流动相为甲醇：水为65:35、流速为10mL/min。