[发明专利]一种利用番茄绿茎紧密连锁标记创制雄性不育系的方法有效
| 申请号： | 202010787253.3 | 申请日： | 2020-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN111875689B | 公开（公告）日： | 2022-02-01 |
| 发明（设计）人： | 张从省;王喜萍;公小君;张婷 | 申请（专利权）人： | 山东玄康种业科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/415 | 分类号： | C07K14/415;C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82;A01H1/02 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 261202 山东省潍坊*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 番茄 紧密 连锁 标记 创制 雄性不育 方法 | ||
1.一种培育番茄雄性不育系的方法，为如下X2)；
X2)敲除番茄中编码MS15蛋白质的基因和编码F3H蛋白质的基因，得到番茄雄性不育系，其中，所述敲除番茄中编码MS15蛋白质的基因和编码F3H蛋白质的基因为使番茄中编码MS15蛋白质的基因和编码F3H蛋白质的基因发生突变，所述突变为纯合突变，而且，所述突变为缺失，缺失片段位于SEQ ID NO.1自5’端第444-448位和位于SEQ ID NO.2自5’端第341-347位；
其中，所述MS15蛋白质是由SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
所述F3H蛋白质是由SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列组成的蛋白质。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述使番茄中编码MS15蛋白质的基因和编码F3H蛋白质的基因发生突变的物质为CRISPR/Cas9系统。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9系统包括Cas9核酸酶和sgRNA。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述sgRNA包括靶向编码MS15蛋白质的基因的sgRNA和靶向编码F3H蛋白质的基因的sgRNA。
5.一种培育番茄保持系的方法，为如下Y2)；
Y2)敲除番茄中编码MS15蛋白质的基因和编码F3H蛋白质的基因，得到番茄保持系，所述敲除番茄中编码MS15蛋白质的基因和编码F3H蛋白质的基因为使番茄中编码MS15蛋白质的基因和编码F3H蛋白质的基因发生突变，所述突变为杂合突变，而且，所述突变为缺失，缺失片段位于SEQ ID NO.1自5’端第444-448位和位于SEQ ID NO.2自5’端第331-353位第341-347位；
其中，所述MS15蛋白质是由SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
所述F3H蛋白质是由SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列组成的蛋白质。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述使番茄中编码MS15蛋白质的基因和编码F3H蛋白质的基因发生突变的物质为CRISPR/Cas9系统。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9系统包括Cas9核酸酶和sgRNA。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述sgRNA包括靶向编码MS15蛋白质的基因的sgRNA和靶向编码F3H蛋白质的基因的sgRNA。
9.扩繁番茄雄性不育系的方法，包括如下步骤：将按照权利要求1-4任一所述方法培育得到的番茄雄性不育系作为母本，将按照权利要求5-8任一所述方法培育得到的番茄保持系作为父本进行杂交，实现番茄雄性不育系的扩繁。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述方法还包括在杂交后代中通过肉眼观察茎秆颜色区分番茄雄性不育系和番茄保持系的步骤。
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