[发明专利]一种高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法，其特征在于：所述高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法具体包括如下步骤：

(1)首先对苹果果肉细胞壁多糖进行提取：

酸水解：称取苹果果肉多糖AIR样品各10mg，一组三个重复，共3组，放入玻璃管中，加入3ml 2mol/L的三氟乙酸，冲入氮气封口，在恒温水浴摇床中70～90℃震荡65h～75h，然后取出，调节PH值；

(2)然后进入酶解步骤：

向溶液中加入25ul VL9逆转录酶，将溶液加热至45℃～55℃，在震荡机中震荡20h～26h，经过震荡后取出煮沸12min～20min；

(3)单糖衍生步骤：

取步骤(2)中得到的液体100ul，向液体中加入氢氧化钠100ul，然后再加入200ul0.6mol/L的PMP，混合均匀，将混合液在65℃～75℃温度下水浴90min～110min，取出避光放置8Min～12Min，然后加100ul盐酸，混匀；再加氯仿萃取2～3次，取上清液过膜，放入样品瓶中；

(4)将样品瓶中的样品送入高效液相色谱检测步骤：

高效液相色谱的检测条件为：采用流动相磷酸盐缓冲液，ph为6.85，用乙腈梯度洗脱，将高效液相色谱仪的柱温设置为30℃～40℃。

2.根据权利要求1所述的一种高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法，其特征在于：步骤(1)调节PH时，分别用1mol/L的NaOH溶液和0.1mol/L的NaOH溶液调节溶液的PH值为5.0。

3.根据权利要求1或2所述的一种高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法，其特征在于：步骤(1)中，在恒温水浴摇床中80℃震荡72h。

4.根据权利要求1或2所述的一种高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法，其特征在于：步骤(2)中，将溶液加热至50℃，在震荡机中震荡24h。

5.根据权利要求1或2所述的一种高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法，其特征在于：步骤(2)中，经过震荡后取出煮沸15min。

6.根据权利要求1或2所述的一种高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法，其特征在于：步骤(3)中，将混合液在70℃温度下水浴100min，取出避光放置10Min。

7.根据权利要求1或2所述的一种高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法，其特征在于：步骤(3)中，加氯仿萃取3次。

8.根据权利要求1或2所述的一种高效液相色谱法检测苹果果肉细胞壁单糖的方法，其特征在于：步骤(4)中，将高效液相色谱仪的柱温设置为35℃。