[发明专利]病毒检测试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 202010778818.1 | 申请日： | 2020-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN111996289A | 公开（公告）日： | 2020-11-27 |
| 发明（设计）人： | 兰婷;唐贵良 | 申请（专利权）人： | 兰婷;唐贵良 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人： | 郑学伟;叶利军 |
| 地址： | 518000 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒 检测 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种病毒检测试剂盒，其特征在于，包括：
核酸释放剂，所述核酸释放剂包括1％SDS盐溶液及蛋白酶K；
RNA-cDNA-RNA＊反应缓冲液，所述RNA-cDNA-RNA＊反应缓冲液包括dNTPs溶液，荧光NTPs＊溶液，T7-GGG-COVID-19特异性引物及T7反义寡核苷酸。
2.根据权利要求1所述的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述RNA-cDNA-RNA＊反应缓冲液还包括镁离子。
3.根据权利要求1所述的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述RNA-cDNA-RNA＊反应缓冲液还包括酶混合液，所述酶混合液包括RNA逆转录酶，核糖核酸酶H及T7 RNA聚合酶。
4.权利要求1所述的病毒检测试剂盒，其特征在于，所述T7-GGG-COVID-19特异性引物的序列为：5′-TAATACGACTCACTATAGGG-NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN 3′，其中NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN为20碱基病毒cDNA特异互补序列；
所述T7反义寡核苷酸的序列是5′TAATACGACTCACTATAGGG3′的反义互补寡核苷酸序列。
5.权利要求1-4中任意一项所述的病毒检测试剂盒，在新型冠状病毒检测中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
将样本加入到核酸释放剂进行孵育，以得到混合溶液；
将预先连接有COVID-19特异的反义寡核苷酸的N+尼龙膜放入收集容器，并在所述收集容器中加入所述混合溶液；
将RNA-cDNA-RNA＊反应缓冲液加入至所述收集容器中，进行从RNA到cDNA再到RNA的反应；
检测所述N+尼龙膜富集反应产物RNA＊后发出的荧光信号。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述孵育的温度为50℃至60℃，时间为5秒至15秒。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述RNA-cDNA-RNA＊反应的温度为35℃至40℃，时间为5至13分钟。
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