[发明专利]病毒保存液、试剂盒以及病毒RNA的超灵敏检测方法

说明书

本发明涉及病毒保存液、用于病毒RNA提取的试剂盒以及病毒RNA的超灵敏检测方法。本发明采用含胍盐的溶液保存病毒样本，可以很好地长时间对病毒RNA进行保存，提高了样本中的病毒RNA提取效率。本发明提供的检测方法可以实现病毒RNA的超灵敏检测，对于病毒在人群中的大规模筛查具有重大意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种病毒保存液、试剂盒以及病毒RNA的超灵敏检测方法。

背景技术

病毒RNA容易降解，无法长时间存活。病毒采样后由于不能及时检测，需要对病毒RNA进行处理，就需要放入病毒保存液中进行保存。不然病毒核酸会很快降解就无法检测到核酸了，所以就需要往采样管里加保存液来让病毒的核酸不要那么快被降解。并保证病毒可以运输和保留。

2020年由于新型冠状病毒疫情的发生，导致大量人员需要做核酸检测。如果一个一个的样本检测需要花费大量的时间及精力，不符合实际要求。因此，往往需要将多个新冠病毒样本混合在一起来做核酸检测，这样可以更快对大量样本进行筛查。

传统用于保存病毒样本的保存液体积大，容易对样本进行过度稀释，导致病毒RNA的含量降低，从而降低检测的灵敏度。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种病毒保存液，所述病毒保存液中含有4～6.5M胍盐，0.5-2％N-月桂酰基肌氨酸以及0.2～1M柠檬酸钠。

本发明提供的病毒保存液保存病毒的温度为-20℃～4℃。

本发明提供的病毒保存液可以将采集到的病毒样本有效保存，且在后续提取过程中可以避免保存液被过多的稀释，提高了病毒RNA的提取效率、检测灵敏度。进一步而言，本发明提供的病毒保存液可以实现对病毒样本的长时间保存，对病毒来源的溯源及相关流行病学研究具有重大的意义。

本发明的第二目的是提供一种用于病毒RNA提取的试剂盒，包含本发明提供的病毒保存液。

作为本发明的优选方案，所述试剂盒中还包括：内含过滤柱的离心管，纳米磁珠，结合缓冲液，清洗缓冲液，50～80％乙醇以及洗脱液。

本发明试剂盒中提供的内含过滤柱的离心管可以过滤掉溶液中的杂质，如灰尘、人体组织等，以提高病毒RNA检测率以及灵敏度。作为一种具体实施方式，所述离心管可以选用RBX离心管。

本发明所述结合缓冲液用于促进病毒RNA和纳米磁珠的结合。所述结合缓冲液中优选包含如下组分：无水乙醇或异丙醇。

本发明所述清洗缓冲液用于将非病毒RNA的杂质清洗掉，以提高产物的纯度。本发明所述清洗缓冲液优选包括清洗缓冲液I和清洗缓冲液II，在使用时，所述清洗缓冲液I和清洗缓冲液II应依次使用。其中，所述清洗缓冲液I包含如下组分：1～2M胍盐，50～80％乙醇；所述清洗缓冲液II包含如下组分：50～80％乙醇。

作为本发明的优选方案，所述试剂盒中包括的病毒保存液与结合缓冲液的体积之比为(3～7)：(2.5～3.5)，如5：3。本发明提供的保存液可以以较低的稀释比例与结合缓冲液混合，以避免病毒RNA的损失，从而提高检测的灵敏度。

作为本发明的优选方案，所述试剂盒中包括的纳米磁珠质量与所述结合缓冲液的体积之比为(1.5mg～4mg)：300ul，优选为2mg：300ul。本发明通过大量实践发现，当纳米磁珠与结合缓冲液的用量比在(1.5mg～4mg)：300ul的范围内时，提取效果最好，其中以2mg：300ul这一特定比例的效果最佳。如果纳米磁珠的用量偏小或者偏大，都会导致提取的RNA效果下降。