[发明专利]一种索玛鲁肽衍生物及其制备方法

说明书

本发明提供了一种索玛鲁肽衍生物及其制备方法。具体地，本发明提供了包含绿色荧光蛋白折叠单元和索玛鲁肽或其活性片段的融合蛋白。本发明的融合蛋白表达量显著提高，并且，本发明融合蛋白中的绿色荧光蛋白折叠单元可以被蛋白酶消化成小片段，和目的蛋白相比分子量差别大，容易分离。本发明还提供了利用该融合蛋白制备索玛鲁肽的方法及制备中间体。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，更具体地涉及一种索玛鲁肽衍生物及其制备方 法。

背景技术

糖尿病是全球范围内威胁人类健康的一大疾病。在中国，随着人民生活方 式的改变和老龄化进程的加快，糖尿病的患病率呈快速上升趋势。糖尿病的急 慢性并发症，尤其是慢性并发症累计多个器官，致残、致死率高，严重影响患 者的身心健康，并给个人、家庭和社会带来沉重的负担。

索玛鲁肽是由Novo Nordisk开发的一种降糖药物，该产品能显著降低2型糖 尿病患者的糖化血红蛋白(HbA1c)水平及减轻体重，同时大大降低低血糖的 风险。Semeglutide是通过对GLP-1(7-37)进行修饰和改造获得。与Liraglutide相 比，Semeglutide的脂肪链更长，疏水性增加，但是Semeglutide经过短链的PEG 修饰，亲水性大大增强。PEG修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖DPP-4 酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果。

索玛鲁肽的CAS号：910463-68-2，英文名Semaglutide，其序列如下： H-His1-Aib2-Glu3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Val10-Ser11-Ser12-Tyr13-Le u14-Glu15-Gly16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys20(PEG2-PEG2-γ-Glu-Octadecanedioic acid)-Glu21-Phe22-Ile23-Ala24-Trp25-Leu26-Val27-Arg28-Gly29-Arg30-Gly31- OH。

专利申请号为CN201611095162，其采用片段缩合的方法合成得到全保护索 玛鲁肽，裂解后获得索玛鲁肽粗肽。由于该方法采用片段进行缩合，其原料不 易获得，且成本高昂。另外，先缩合主链至第5位的Thr，再脱除20位Lys的侧链 保护基团Alloc，进行侧链的缩合。此方法在合成过程中易造成片段2树脂的缩 聚，大大降低20位Lys后的氨基酸及片段1的偶联效率，且易产生消旋杂质，不 利于工业化生产。

专利申请号为CN201511027176，采用固相合成方法获得全保护索玛鲁肽树 脂，经裂解后获得索玛鲁肽粗肽，经纯化获得索玛鲁肽精品。此方法采用先缩 合主链，再脱除Lys侧链保护基团Alloc，进行侧链的缩合。此方法在合成过程 中易造成树脂的缩聚，大大降低偶联效率，且易产生消旋杂质，特别是造成最 后一个氨基酸His的消旋，大大降低了产品的收率，增加了生产成本。

因此，本领域技术人员致力于新的方法生产索玛鲁肽。

发明内容

本发明的目的在于提供一种索玛鲁肽衍生物及其应用。

在本发明的第一方面，提供了一种索玛鲁肽前体融合蛋白，所述的索玛鲁肽融 合蛋白从N端到C端具有式I所示的结构：

A-FP-TEV-EK-G (I)

式中，

“-”代表肽键；

A为无或前导肽序列，

FP为绿色荧光蛋白折叠单元；

TEV为第一酶切位点，较佳地为TEV酶酶切位点(如序列ENLYFQG所示，SEQ ID NO:8)；

EK为第二酶切位点，较佳地为肠激酶酶切位点(如序列DDDDK所示，SEQ ID NO:9)；