[发明专利]一种菌群双层平板计数法

说明书

本发明提供一种菌群双层平板计数法，其特征在于：依次包含如下步骤，步骤1：制备样品匀液和样品稀释液；步骤2：取1mL样品稀释液加入无菌培养皿中；步骤3：将灭菌后的非选择性培养基倒入培养皿中，铺成平板，放置，使样品中的菌群得到修复；步骤4：在修复后的平板上倒入选择性培养基，平铺，培养；步骤5：计数菌群。本发明中通过增加修复步骤，使得灵敏度显著高于国标法，大大提高检出率，且具备成本低、操作简便的优势，具有实用性。

技术领域

本发明涉及新型微生物分离检测技术，尤其涉及检出冷冻饮食品中菌群的领域。

背景技术

大肠菌群定义为在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。大肠菌群作为食品卫生评价的重要微生物检测指标，在食品安全中受到严格监控，同时也是冷冻饮食品控制的重要指标。

冷冻饮食品大肠菌群检验通常依据食品安全国家标准《食品微生物学检验大肠菌群》(GB4789.3-2016)第二法，使用结晶紫中性红胆盐琼脂(violet red bile agar,VRBA)进行大肠菌群培养并计数。但是，冷冻饮食品中的大肠菌群处于冷冻环境，使其遭受不同程度的亚致死性损伤成为损伤菌，亚致死损伤菌是指在非选择性培养基中可形成菌落，而在选择性培养基上不能形成菌落，当所处环境适宜，亚致死状态下的微生物会复苏并且恢复繁殖能力。VRBA作为选择性培养基其含有一定的抑菌物质，冷冻受损后的大肠菌群表现为对选择性培养基VRBA不敏感，若不经过修复直接用国标平板法进行检测很难使损伤菌生长，则会导致冷冻饮食品的大肠菌群检出率低。

发明内容

要解决的技术问题

本发明的目的是，提供一种可提高菌群检出率的方法。

解决问题的技术方案

本发明提供一种菌群双层平板计数法，其特征在于：依次包含如下步骤，

步骤1：制备样品匀液和样品稀释液；

步骤2：取1mL样品稀释液加入无菌培养皿中；

步骤3：将灭菌后的非选择性培养基倒入培养皿中，铺成平板，放置，使样品中的菌群得到修复；

步骤4：在修复后的平板上倒入选择性培养基，平铺，培养；

步骤5：计数菌群。

所述菌群优选为大肠菌群。

所述非选择性培养基优选为大豆酪蛋白琼脂(tryptose soya agar,TSA)培养基。

所述选择性培养基优选为结晶紫中性红胆盐琼脂(violet red bile agar,VRBA)培养基。

优选所述步骤1、步骤2、步骤4、步骤5是按照GB4789.3-2016第二法进行。

所述步骤3中，优选将灭菌后的非选择性培养基降至45-50℃时倒入培养皿中，使得8-10mL/平皿，铺成平板，于室温放置，使样品中的菌群得到修复。

所述步骤3中，优选将灭菌后的非选择性培养基降至45℃时倒入培养皿中。

所述步骤4中，优选在修复后的平板上倒入45℃的VRBA培养基，使得10-12mL/平皿，铺平，待培养基凝固后于36℃培养24h。

所述步骤3中，优选于室温放置2±0.5h，使样品中的菌群得到修复。

所述步骤3中，优选于室温放置2h，使样品中的菌群得到修复。

有益效果

根据本发明的菌群的检出方法，通过增加修复步骤，能够大大提高菌群的检出率，灵敏度显著高于国标法，具有明显的优势，且具备成本低、操作简便的优势，具有实用性。