[发明专利]一种检测蔬菜水果中蛔虫卵的引物及其方法和应用

说明书

本发明公开了一种检测蔬菜水果中蛔虫卵的引物及其方法和应用，所述的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示。将待测样品基因组DNA PCR扩增后，凝胶电泳检测，于凝胶成像系统下拍照检测，存在628bp的DNA特异性条带，则确定样品中含有蛔虫卵。本发明引物可用于即食凉拌菜、沙拉、生食蔬菜等食品以及各类水果中猪蛔虫与犬弓首蛔虫虫卵的检测和鉴定，在食品安全检测、卫生健康保障和快速检测鉴定生食蔬菜以及水果中猪、犬蛔虫虫卵等方面都具有显著的实际意义。

技术领域

本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种检测蔬菜水果中蛔虫卵的引物及其方法和应用。

背景技术

传统饮食上将未经加热处理便可直接食用的蔬菜、水果等统称生食食物。近年来出于对营养和口感的追求，餐饮中生食蔬菜的消费品种、消耗量及消费人群在全球呈扩大和上升趋势，与之相伴的各类水果因其富含维生素及多种营养素也正日益成为我们饭前、餐后不可缺少的食物。然而越来越多证据显示，生食蔬菜以及水果往往存在较大的生物安全风险，如细菌和寄生虫卵(卵囊)污染。例如，2017年据部分国家的食品安全风险评估中心与疾病预防控制中心调查结果显示，90％的生食蔬菜(包括凉拌菜)以及水果存在细菌和寄生虫卵(卵囊)污染现象(李莹等，2019)。值得一提的是，在某些地区的随机样品检查结果发现，寄生虫卵(卵囊)的污染最高可达40％以上(Taghipour等，2019)，该数据使得寄生虫卵(卵囊)污染成为继大肠杆菌、沙门氏菌等细菌污染之后，另一种危害人体健康的食品安全因素，因此日益受到人们的关注。

另外，据1999-2019的相关文献报道结果显示，在生食蔬菜及水果等食物的寄生虫卵(卵囊)污染调查结果中，蛔虫卵污染十分常见，检出率均在20％以上(部分甚至达96％)，其种类包括猪蛔虫(Ascaris suum)、犬弓首蛔虫(Toxocara canis)以及人蛔虫(Ascarislumbricoides)(RobertsonGjerde，2000；马才良等，2001；2005；区继军等，2005；何剑营等，2008；Abougrain等，2010；杨冬华等，2011；El Said Said等，2012；王恒鹏等，2012；Bekele等，2017；Taghipour等，2019)。猪蛔虫与人蛔虫一样，当人误食其感染性虫卵后，幼虫在肠道孵出后穿过肠壁，经血液循环进入人体组织器官进行移行，触发内脏幼虫移行症(Visceral larva migrans，VLM)，造成肝脏、肺脏、胰腺等器官的机械性损伤，引起出血和炎症等，严重时可造成死亡(DoldHolland，2011)。另外，猪蛔虫和人蛔虫成虫均可寄生于人的小肠，吸取养分；然而当寄生数量较多时，可直接造成肠道阻塞，危及生命。犬弓首蛔虫是目前全球公认的另一种重要的人畜共患蛔虫。人误食其感染性虫卵后，其幼虫除了可以引起内脏幼虫移行症外，还可引起人的眼睛幼虫移行症(Ocular larvamigrans，OLM)、隐性弓首蛔虫病和非化脓性脑膜脑炎等病理综合症。感染人群会出现多种病症，如软弱、思睡、厌食、不明原因低热、绞痛、颈淋巴结炎、行为障碍等。儿童感染常表现智力缺陷或行为障碍(Schantz，1989；Ma等，2018)。

目前对生食蔬菜以及水果中蛔虫卵的检测仍主要依赖传统的虫卵检测方法(如直接涂片法、饱和盐水漂浮法)，存在极大的漏检以及无法准确判定蛔虫种类等问题(Amoah等，2017)。因此急需寻求另一种有效且特异的检测方法。PCR方法因其具有良好的灵敏度和特异性目前已在食品寄生虫卵(卵囊)污染检测中大量使用(赵昕等，2009；Gordon等，2011；Amoah等，2017)；然而遗憾的是，至今关于蔬菜、水果寄生虫卵污染的PCR检测方法研究尚属空白。

发明内容

鉴于此，本发明本实验拟建立一种用于蔬菜、水果蛔虫卵污染的PCR检测方法，以期为生食蔬菜以及水果卫生安全提供评价依据以及卫生保障。

为了达到上述技术目的，本发明具体通过以下技术方案实现：

一种检测蔬菜水果中蛔虫卵的引物，所述的引物包括正向引物和反向引物，具体为：