[发明专利]一种用于胰腺癌早期诊断的生物标志物的检测试剂

说明书

本发明涉及一种用于胰腺癌早期诊断的生物标志物的检测试剂，该生物标志物包括血液胞外囊泡miRNA生物标志物hsa‑miR‑95‑3p和hsa‑miR‑26b‑5p，以及进一步的可与血清中糖类抗原CA19‑9结合，作为区分胰腺癌和胰腺炎的生物标志物。本发明首次提出并验证了血液胞外囊泡miRNA作为生物标志物，并将其结合血清中糖类抗原CA19‑9表达水平区分胰腺炎和胰腺癌患者时具有高特异性、高敏感性和高阳性预测值，对于胰腺癌早期诊断具有重要意义。

技术领域

本发明涉及疾病早期检测技术领域，尤其涉及一种用于胰腺癌早期诊断的生物标志物的检测试剂。

背景技术

在世界范围内胰腺癌是发病率和死亡率较高的恶性肿瘤，其中超过90％的为胰腺导管腺癌。由于胰腺特殊的解剖位置早期发病无症状，常在肿瘤侵袭周围组织后发病，此时患者已为晚期，失去了手术切除的机会，并容易与慢性胰腺炎混淆。而胰腺导管腺癌预后较差，患者五年生存率小于8％。另一方面，有时胰腺肿块与慢性胰腺炎或良性胰腺囊肿难以区分，导致病变活检的病理评估结果可能不明确，慢性胰腺炎可能被误诊为胰腺癌导致不必要的胰腺切除手术。同时，慢性胰腺炎又可增加胰腺癌的患病风险。在临床上如何鉴别诊断胰腺癌和慢性胰腺炎患者，如何明确胰腺炎肿块中没有癌细胞以避免不必要的手术切除是非常具有挑战性又常见的问题。因此，如何准确高效的鉴别诊断慢性胰腺炎和胰腺癌患者在临床上具有重要意义。

目前，胰腺癌的诊断方法有胸部影像学、内镜超声引导下细针穿刺活检(EUS-FNA)以及糖类抗原19-9(CA19-9)检测等，但这些方法的检测效果均有一定的局限性。胸部影像学检查方法包括CT、核磁共振成像(MRI)和PET-CT等，但影像学检测方法难以区分肿块型胰腺炎和胰腺癌。而EUS-FNA是一种侵入性检测方法容易引起感染、出血和肿瘤扩散的风险，更重要的是假阴性率较高。CA19-9是基于血液的肿瘤标志物被广泛用于胰腺癌的监测，据报道CA19-9对区分胰腺癌和良性胰腺疾病的敏感性和特异性有限，敏感性为78.2％，特异性为82.8％，无法作为有效的鉴别诊断标志物。因此，急需开发基于微创诊断方法的肿瘤标志物及检测试剂来提高胰腺炎和胰腺癌鉴别诊断的效果。

胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)是由多种不同细胞释放到细胞外的囊泡，可分为多种类型。其中，一类小型胞外囊泡，又称外泌体，是一种直径约30-150nm的膜性囊泡。胞外囊泡是由核酸、蛋白质、脂质等组成几乎存在于所有的生物体液中。外周血中游离的胞外囊泡作为一种重要液体活检形式已得到广泛的关注和深入研究，近期，研究显示来源于血液胞外囊泡的miRNA被认为是一种潜在的诊断标志物应用于胰腺癌的检测。Xu-yifan等人的研究证实与健康人群相比胰腺癌患者血浆胞外囊泡miR-196a和miR-1246表达是显著性升高的。而Caterina Vicentini等人的研究表明在胰腺癌vs慢性胰腺炎患者中血浆胞外囊泡的miRNA表达存在一些差异，miR-372-3p、miR-140-3p、miR-644a的表达是上调的，miR-1299、miR-146a-5p、miR-148b-3p、miR-130a-3p、miR-4454、miR-7975表达是下调的。然而，这些研究样本量较小、检测胞外囊泡miRNA的数量较少、没有慢性胰腺炎样本作为对照、或缺少独立的验证试验、基于芯片或RT-PCR技术无法发现胞外囊泡中未知的miRNA，导致缺乏来源于血液胞外囊泡的miRNA作为有效的生物标志物来鉴别慢性胰腺炎和胰腺癌。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提出一种用于胰腺癌早期诊断的生物标志物的检测试剂，利用血液胞外囊泡miRNA作为生物标志物，并将其结合血清中糖类抗原CA19-9表达水平区分胰腺炎和胰腺癌患者时具有高特异性、高敏感性和高阳性预测值，能够辅助胰腺癌早期诊断。

为实现以上目的，本发明所采用的技术方案包括：